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目的:探讨RhoC骨肉瘤发生侵袭转移中的作用和调控的分子机制。方法:通过细胞培养技术培养不同转移潜能的骨肉瘤细胞株SOSP-9607H9(低侵袭能力组)及SOSP-9607E10(高侵袭能力组),生长曲线比较两个细胞株的细胞增殖能力,应用RT-PCR和Western-blot方法在mRNA和蛋白水平检测RhoC的表达水平,进一步采用划痕愈合实验(Wounding heal assay)和侵袭小室实验(Transwell assay)比较两种不同骨肉瘤细胞株的侵袭运动能力,分析骨肉瘤细胞侵袭运动能力与RhoC的表达水平的相关性;通过构建pCDNA3.1-RhoC质粒转染采用Life2000脂质体转染低侵袭潜能组SOSP-9607H9细胞,经G418筛选,获得过量表达RhoC蛋白的骨肉瘤细胞模型实验,从逆向验证RhoC的高表达调控骨肉瘤细胞的侵袭运动;设计RhoCsiRNA片段,将T4载体和SiRNA-RhoC用限制性内切酶酶切连接,采用磷酸钙沉淀法转染MSCVneo-SiRhoC片段至逆转录病毒包装细胞PT67细胞,取病毒上清干扰沉默过量表达RhoC的高侵袭转移潜能SOSP-9607E10细胞株,再次采用划痕实验和侵袭小室检测两种骨肉瘤细胞株的侵袭运动能力。结果:两组细胞在开始接种时期无差异,当进而细胞对数生长期后,SOSP-9607 E10细胞增殖能力明显增强。在RhoCmRNA水平,高侵袭转移潜能SOSP-9607E10细胞中目的基因RhoCmRNA(181bp)条带和内参GAPDH基因条带(500bp)的表达光密度比值(1.93±0.11)高于低侵袭潜能组SOSP-9607H9细胞(0.71±0.09),差异有显著性(p＜0.05);在RhoC蛋白水平,高侵袭转移潜能SOSP-9607E10细胞中目的蛋白RhoC条带(27Kda)表达和内参Actin条带(42Kda)的表达光密度比值(2.57±0.07)高于低侵袭潜能组SOSP-9607H9细胞(0.95±0.03),差异有显著性(p＜0.05)。过量表达RhoC基因SOSP-9607E10细胞与低表达RhoC基因SOSP-9607H9细胞的划痕愈合能力完全不同;划痕24小时过量表达RhoC基因细胞基本上爬满划痕区域,达到划痕的愈合,而低表达RhoC基因细胞则只有少量细胞爬行划痕区域,仍然留有明显的划痕存在。两个细胞株侵袭透过人工基底膜的平均细胞数分别为42.5±2.8和5.1±1.2个,比较两组细胞穿透人工基底膜平均细胞数的差异具有高度显著性(P=0.000)。转染pcDNA3.1-RhoC质粒组SOSP-9607H9细胞中目的基因RhoCmRNA(181bp)条带和内参GAPDH基因条带(500bp)的表达光密度比值(1.75±0.07)高于转染pcDNA3.1质粒细胞中RhoCmRNA的表达(0.69±0.12),差异有显著性(p＜0.05);在RhoC蛋白水平,转染pcDNA3.1-RhoC质粒后SOSP-9607E10细胞中目的蛋白RhoC条带(27Kda)表达和内参Actin条带(42Kda)的表达光密度比值(2.13±0.12)高于转染pcDNA3.1质粒SOSP-9607H9细胞(0.91±0.14),差异有显著性(p＜0.05),说明RhoC基因已被转染到SOSP-9607H9细胞并转录合成蛋白,进一步采用划痕愈合实验和侵袭实验检测发现,获得过量表达RhoC的细胞侵袭运动能力增强。构建转染重组逆转录病毒载体MSCVneo-SiRhoC片段,采用磷酸钙沉淀法转染逆转录病毒包装细胞PT67,转染效率约为65%左右,经用400ug/ml G418筛选,MSCVhyg-GFP用100 ug/ml Hygromycin筛选,获得上清病毒滴度为2×10~6cfu/ml,用此浓度病毒上清转染SOSP-9607E10细胞效率较高约96%,Western-bolt方法检测SiRhoC前后RhoC蛋白的表达水平转染SiRhoC片段后SOSP-9607E10细胞中过量表达的RhoC被沉默。过量表达RhoC基因沉默后的SOSP-9607E10细胞则只有少量细胞爬行划痕区域,仍然留有明显的划痕存在,在高倍镜下计数SOSP-9607E10骨肉瘤细胞株侵袭过人工基底膜的平均细胞数干扰前和干扰后分别为47.9±5.6和8.4±2.2个,比较两组细胞穿透人工基底膜平均细胞数的差异具有高度显著性(P=0.000)。结论:RhoC的差异表达可能是导致骨肉瘤细胞株SOSP-9607H9和SOSP-9607E10具有不同肿瘤细胞生物学行为和不同侵袭运动能力差异的原因之一;RhoC的过量表达调控骨肉瘤细胞运动能力的机制在骨肉瘤侵袭转移中发挥关键性作用。