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目的①研究2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME2)对人急性T淋巴细胞白血病细胞株CEM细胞增殖、周期和凋亡的影响。②观察2-甲氧基雌二醇对CEM细胞增殖、周期和凋亡相关基因及蛋白表达水平的影响,探讨其作用机制。方法用MTT法检测2-ME2对CEM细胞增殖活性的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳和AnnexinV/PI双染色法检测2-ME2对CEM细胞凋亡的影响;流式细胞术检测2-ME2对CEM细胞线粒体膜电位和细胞周期的影响;RT-PCR检测2-ME2作用前后对CEM细胞c-myc、bcl-2、p21、p53、h-TERT基因mRNA表达水平的影响;蛋白印迹法(Western-Blotting)检测2-ME2作用前后对CEM细胞c-Myc、Bcl-2、Cyto-c、Pro-caspase-3、Pro-caspase-9、PARP蛋白以及PI3-K/Akt信号转导通路中蛋白p-AKT、Akt和细胞周期调节相关蛋白P21和P53表达水平的影响。结果(1) MTT法结果显示2-ME2能够抑制CEM细胞增殖,并呈现时间和剂量依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为2.0μmol/L;DNA琼脂糖凝胶电泳和AnnexinV/PI双染色法流式细胞仪检测结果显示2-ME2诱导CEM细胞凋亡;流式细胞术检测结果显示2-ME2诱导CEM细胞线粒体膜电位下降和细胞周期阻滞于G2/M期;细胞凋亡率和周期阻滞程度在一定药物作用浓度下呈现剂量依赖关系。(2)2.0μmol/L 2-ME2处理CEM细胞0、24、48和72h可降低CEM细胞中的h-TERT基因mRNA和bcl-2、c-myc、p53基因mRNA及蛋白表达,上调p21基因mRNA和蛋白表达;降低procaspase-3、procaspase-9、PARP(116Kda)和Akt磷酸化水平,上调胞浆Cyto-c和PARP活性片段(85Kda),而总Akt蛋白无影响。结论(1)2-ME2能够有效抑制CEM细胞增殖,并具有时间和剂量依赖关系;诱导其凋亡,具有剂量依赖关系。其机制可能是通过降低细胞线粒体膜电位,释放Cyto-c,下调procaspase-9、procaspase-3、bcl-2、c-myc基因mRNA和/或蛋白的表达及下调hTERT基因mRNA的表达;同时,通过抑制Akt蛋白的磷酸化,干扰PI3K/Akt信号转导通路也参与了该过程;(2)2-ME2能够诱导CEM细胞周期阻滞于G2/M期,并呈现剂量依赖关系。其机制可能与以p53非依赖性方式上调p21基因mRNA和蛋白的表达有关。