TLR4/NF-κB信号转导通路调控膝骨性关节炎滑膜中TLR4、NF-κB p65表达的实验研究

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zygqqx
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目的通过检测对比原发性膝骨性关节炎患者与膝前交叉韧带损伤和(或)半月板损伤患者手术治疗术中去除的膝关节滑膜组织中TLR4、NF-κB p65表达强弱,从而验证TLR4/NF-κB信号转导通路中效应蛋白在膝骨性关节炎滑膜组织中的表达情况,探讨TLR4/NF-κB信号转导通路与膝骨性关节炎滑膜炎症的发病相关性。方法收集2019年11月至2021年5月因原发性膝骨性关节炎就诊我院的30例患者,行人工全膝关节置换手术过程中去除的滑膜组织为观察组;以同期因膝前交叉韧带损伤和(或)半月板损伤行膝关节镜手术治疗术中去除的滑膜组织30例为对照组。先观察标本外观形态,实验室行标本处理。通过HE染色,显微镜下观察两组标本滑膜形态变化。通过免疫组织化学(IHC)、免疫印迹(WB)检测TLR4、NF-κB p65蛋白在两组标本中不同的表达。应用RT-q PCR检测TLR4、NF-κB p65 m RNA的表达变化。所获数据均采用SPSS22.0统计学软件进行分析计算。结果(1)大体形态观察:观察组可见滑膜组织广泛增生、明显充血水肿,呈黄色;与对照组形成鲜明对比,对照组滑膜组织呈白色或淡红色,滑膜表面光滑闪光,质薄无水肿。(2)HE染色结果:显微镜下见观察组滑膜组织增生明显,组织染色不均,边缘粗糙不整齐,滑膜下层新生毛细血管生成,伴随炎性细胞浸润,组织分界明显可见细胞发生变性、坏死;对照组滑膜组织边缘整齐光滑,染色均匀淡染,滑膜细胞形态正常,均匀分布,排列正常,结构层次清晰,未观察到炎性细胞浸润。(3)免疫组化染色结果:观察组TLR4阳性表达呈淡黄色或棕黄色颗粒分布于细胞胞质、细胞胞膜上及细胞间质中,对照组中TLR4无表达;滑膜组织中NF-κB p65表达呈阳性,阳性染色颗粒分布于细胞核中;对照组中仅见少量阳性表达。通过Image-pro plus 6.0对两组积分光密度值(Integral optical density,IOD)测定取平均值,观察组IOD平均值明显高于对照组IOD平均值。(4)Western blot检测结果:与对照组相比,观察组TLR4、NF-κB p65蛋白表达含量明显高于对照组。(5)RT-qPCR结果:与对照组相比,观察组TLR4、NF-κB p65 m RNA表达含量明显高于对照组。结论TLR4/NF-κB信号转导通路中的TLR4、NF-κB p65蛋白分子在膝骨关节炎患者滑膜组织中表达明显高于膝前交叉韧带损伤和(或)半月板损伤患者,且TLR4、NF-κB p65 m RNA表达明显高于膝前交叉韧带损伤和(或)半月板损伤患者,提示TLR4/NF-κB信号转导通路在膝骨性关节炎滑膜炎症中被激活,可能在膝骨关节炎滑膜炎症的发生发展中起到一定的作用。
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