蝗虫VgR时空表达分析及温度胁迫、微孢子虫感染对卵黄沉积的调控机制初探

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卵黄原蛋白受体作为卵巢的特异性蛋白,在卵黄蛋白的积累和沉积中起到关键性作用。本研究在已知意大利蝗(Calliptamus italicus)卵黄原蛋白受体基因(Ci Vg R)序列全长基础上,从蛋白质水平及细胞定位等方面,解析Ci Vg R的表达及动态变化。同时,以东亚飞蝗(Locusta migratoria)为研究对象,分析温度胁迫和微孢子虫侵染条件下,卵黄原蛋白受体的表达动态,探究应激条件下机体是否通过诱导热激蛋白调控卵黄发生。主要研究结果如下:一、CiVgR蛋白水平和细胞水平的表达动态分析CiVgR在雌虫的整个卵黄发生时期均有表达,在卵黄发生前期(羽化后1-7 d)和卵黄发生期(羽化后8-12 d)表达量持续升高,并且在羽化后12 d表达量达到峰值;在后期阶段(羽化后13-22 d),表达量较低。细胞水平分析结果表明,在发生前期,Ci Vg R主要分布在卵母细胞的细胞膜和细胞质中;在发生期Ci Vg R主要分布在细胞质和卵母细胞膜上。二、温度胁迫对VgR和Hsps表达的影响本研究通过RT-qPCR技术,分析了温度胁迫条件下,东亚飞蝗卵巢不同发育阶段Vg R、Hsp20.7、Hsp40、Hsp70、Hsp90相对表达量及动态变化。结果显示低温胁迫时,随温度降低,Vg R表达量(峰值)呈下降趋势,且第一、二次卵黄发生时,Vg R表达峰值提前;而高温胁迫时,随温度升高,Vg R表达量(峰值)亦呈下降趋势,且第一、二次卵黄发生时,Vg R表达峰值延迟。表明温度过低或过高都可能会影响东亚飞蝗卵巢发育。低温处理条件下(15℃、20℃),Hsp20.7、Hsp40、Hsp70、Hsp90表达量均在较低水平;高温40℃处理时,Hsp70的表达量显著上升;高温45℃时,Hsp90的表达量显著上升。Hsps在低温胁迫时并未增强卵巢的抗寒能力;但在高温胁迫时Hsp70和Hsp90表达量的显著上升,表明其可能参与增强卵巢耐热能力的过程。三、感染微孢子虫对VgR和Hsps表达的影响本研究通过RT-qPCR技术,分析了微孢子虫感染条件下,东亚飞蝗卵巢不同发育阶段5个基因相对表达量及动态变化。结果表明,不同浓度微孢子虫感染条件下,Vg R表达均显著下调;感染浓度为1×10~4孢子/头时,Hsps表达显著上调;感染浓度为1×10~6孢子/头,Hsps在12 d时表达显著上调。表明昆虫在受到微孢子虫胁迫后繁殖能力显著降低,且Hsps基因在该胁迫下可能参与抵抗外界病原体侵害的过程。
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