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【背景与目的】食管癌是世界范围内第八大高发的恶性肿瘤。我国食管癌在男性中的发病率已经跃至第三位,仅次于肺癌和胃癌,而在女性中其发病率占据第五位。食管癌的死亡率在男女性别中均居第四位。我国绝大部分以食管鳞癌为主。已有研究表明,SNHG20(SmallnucleolarRNAhostgene20,小核RNA宿主基因20)在肝细胞癌、乳腺癌和宫颈癌等多种恶性肿瘤中高表达且与肿瘤的进展相关,但是,SNHG20在食管鳞癌中的表达及可能的相关机制尚未见报道。本研究首先探索SNHG20在食管鳞癌中的表达、SNHG20表达的高低与临床各个变量之间的相关性及其与预后的关系,然后通过食管鳞癌细胞的体外实验进一步研究SNHG20在食管鳞癌中可能的生物学机制。
【方法】
1.使用qRT-PCR法检测SNHG20在食管鳞癌组织及细胞中的表达。
2.对80例临床病例资料进行研究SNHG20表达的高低与临床各个变量及预后的相关性。
3.转染特定设计的质粒载体以敲减SNHG20的表达后,研究SNHG20对食管鳞癌细胞的增殖及凋亡的影响。
4.运用细胞迁移侵袭试验技术研究食管鳞癌细胞的迁移及侵袭能力,并通过检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达,以了解SNHG20是否促进食管鳞癌的转移。
5.通过拯救试验研究SNHG20是否通过调节ATM-JAK-PD-L1信号通路来促进食管鳞癌细胞的增殖及转移。
【结果】
1.SNHG20在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌周正常组织(P<0.01);SNHG20在食管鳞癌细胞株中的表达明显高于人食管上皮细胞(P<0.01),且在KYSE450食管癌细胞株中表达最高。
2.单因素分析显示,SNHG20的高表达与肿瘤大小(P=0.007)、淋巴结是否转移(P=0.007)、原发的肿瘤的TNM分期(P=0.001)及肿瘤的分化程度(P=0.014)呈现显著相关;Cox回归模型分析结果显示,越晚的肿瘤临床TNM分期(P=0.026)和SNHG20的高表达(P=0.013)是影响食管鳞癌患者预后的两个独立危险因素;Kaplan-Meier生存分析结果显示,SNHG20高表达的食管鳞癌患者的生存期明显短于SNHG20低表达组患者的生存期(P=0.004)。
3.经敲除和过表达试验研究发现,敲除SNHG20表达后,食管鳞癌细胞中SNHG20的表达下调、细胞存活率降低、细胞克隆减少、细胞凋亡增加;而使SNHG20过表达后,人食管上皮细胞中SNHG20的表达上调、细胞存活率增加、细胞克隆增多、细胞凋亡减少。
4.细胞迁移侵袭试验技术结果显示,敲除SNHG20后的食管鳞癌细胞的迁移和侵袭能力明显下降,E-cadherin的表达明显升高,而N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达则明显受到抑制;而SNHG20在Het-1A中过表达后则结果相反。
5.p-ATM、p-JAK和PD-L1在敲除SNHG20后的食管鳞细胞中均出现表达下调,而在SNHG20过表达的Het-1A中则表达明显上调。拯救试验显示,异位表达的ATM重新使得SNHG20表达沉默的HYSE450细胞在迁移和侵袭能力方面有明显的增强,ATM的上调明显抑制了E-cadherin的表达,同时也明显增强了N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达上调
【结论】
1.SNHG20在食管鳞癌中表现为一种癌基因;SNHG20高表达的食管鳞癌患者的预后相对较差,有可能成为临床上评价食管鳞癌患者预后的一种新型生物学指标;
2.SNHG20通过ATM-JAK-PD-L1信号通路来促进食管鳞癌的增殖及转移,有可能成为一个潜在的分子治疗的靶点。
【方法】
1.使用qRT-PCR法检测SNHG20在食管鳞癌组织及细胞中的表达。
2.对80例临床病例资料进行研究SNHG20表达的高低与临床各个变量及预后的相关性。
3.转染特定设计的质粒载体以敲减SNHG20的表达后,研究SNHG20对食管鳞癌细胞的增殖及凋亡的影响。
4.运用细胞迁移侵袭试验技术研究食管鳞癌细胞的迁移及侵袭能力,并通过检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达,以了解SNHG20是否促进食管鳞癌的转移。
5.通过拯救试验研究SNHG20是否通过调节ATM-JAK-PD-L1信号通路来促进食管鳞癌细胞的增殖及转移。
【结果】
1.SNHG20在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌周正常组织(P<0.01);SNHG20在食管鳞癌细胞株中的表达明显高于人食管上皮细胞(P<0.01),且在KYSE450食管癌细胞株中表达最高。
2.单因素分析显示,SNHG20的高表达与肿瘤大小(P=0.007)、淋巴结是否转移(P=0.007)、原发的肿瘤的TNM分期(P=0.001)及肿瘤的分化程度(P=0.014)呈现显著相关;Cox回归模型分析结果显示,越晚的肿瘤临床TNM分期(P=0.026)和SNHG20的高表达(P=0.013)是影响食管鳞癌患者预后的两个独立危险因素;Kaplan-Meier生存分析结果显示,SNHG20高表达的食管鳞癌患者的生存期明显短于SNHG20低表达组患者的生存期(P=0.004)。
3.经敲除和过表达试验研究发现,敲除SNHG20表达后,食管鳞癌细胞中SNHG20的表达下调、细胞存活率降低、细胞克隆减少、细胞凋亡增加;而使SNHG20过表达后,人食管上皮细胞中SNHG20的表达上调、细胞存活率增加、细胞克隆增多、细胞凋亡减少。
4.细胞迁移侵袭试验技术结果显示,敲除SNHG20后的食管鳞癌细胞的迁移和侵袭能力明显下降,E-cadherin的表达明显升高,而N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达则明显受到抑制;而SNHG20在Het-1A中过表达后则结果相反。
5.p-ATM、p-JAK和PD-L1在敲除SNHG20后的食管鳞细胞中均出现表达下调,而在SNHG20过表达的Het-1A中则表达明显上调。拯救试验显示,异位表达的ATM重新使得SNHG20表达沉默的HYSE450细胞在迁移和侵袭能力方面有明显的增强,ATM的上调明显抑制了E-cadherin的表达,同时也明显增强了N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达上调
【结论】
1.SNHG20在食管鳞癌中表现为一种癌基因;SNHG20高表达的食管鳞癌患者的预后相对较差,有可能成为临床上评价食管鳞癌患者预后的一种新型生物学指标;
2.SNHG20通过ATM-JAK-PD-L1信号通路来促进食管鳞癌的增殖及转移,有可能成为一个潜在的分子治疗的靶点。