益气补肾方药对荷瘤小鼠化疗的减毒作用

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目的: 肿瘤已成为严重危害人类健康的疾病之一,全世界每年死于恶性肿瘤的人约有700多万。目前,临床上治疗肿瘤的常规疗法(手术、化疗、放疗)已能使近半数的恶性肿瘤患者得到治愈。但化疗或放疗会导致多种毒副作用,例如:骨髓抑制、免疫力低下、消化障碍、机体衰弱。不少患者最终不是死于肿瘤本身,而是死于化疗、放疗所致的继发感染和脏器功能衰竭,严重妨碍了治疗的顺利进行,明显影响了治疗效果。研究降低化疗毒性的方法,对治疗肿瘤、延长生命、提高生存质量有重要的意义。肿瘤患者接受化疗后出现的症状,按中医辩证,可归为气血受损、肝肾亏虚,表现出阴虚、阳虚、气虚或血虚等类似“虚证”的证候。对此应采取扶正培本的治疗原则,补五脏之气、调整阴阳,以改善“虚证”症状。通过生理学、生物化学、免疫学以及分子生物学的研究表明,多种补益药物与化疗药合用治疗肿瘤,具有减毒增效、扶正祛邪的作用。补益药物可以通过调节机体的内分泌系统、神经系统、免疫系统、心血管系统等来提高肿瘤化疗病人的治疗效果。人参、黄芪是补气的要药,两药相须配对,可以达到补气生血的目的,具有强大的补气助阳作用。实验证明二药具有提高巨噬细胞活性、增加细胞因子表达的作用。金匮肾气方为我国经典补肾方药,该方滋补肾虚的作用已被<WP=4>世人公认。金匮肾气方配伍适量的人参和黄芪,既能更好的增强其补肾效果,又能促进全身气血的化生,宋淑霞把该方定名为益气补肾方药(tonifying kidney plus strengthening vital energy TS)。研究证明益气补肾方药可以提高衰老小鼠机体的免疫功能,并进一步证明该方药比单用人参、黄芪和金匮肾气方药更能明显的提高衰老机体内NK细胞活性和IL-2 mRNA的表达。本实验用环磷酰胺治疗荷H22瘤小鼠,造成机体免疫力低下模型。给模型小鼠灌胃益气补肾方药,以小鼠的体重、白细胞数、NK细胞活性、Mφ细胞吞噬能力、脾脏淋巴细胞增殖活性以及脾脏细胞IL-12 mRNA的表达作为检测指标,目的在于观察益气补肾方药拮抗化疗导致机体免疫力低下的作用,并对其作用机理进行研究与探讨。方法: 将20±1g昆明小鼠,随机分为4组:盐水(NS)组(0.5ml无菌生理盐水腹腔注射,0.2ml蒸馏水灌胃),益气补肾方药(TS)组(0.5ml无菌生理盐水腹腔注射,0.2ml TS方药灌胃), 环磷酰胺(CY)组(2%CY以50mg/kg腹腔注射,0.2ml蒸馏水灌胃),益气补肾方药加环磷酰胺(TS+CY)组(2%CY以50mg/kg腹腔注射,0.2ml TS方药灌胃)。调整小鼠腹腔传代的H22肿瘤细胞浓度为6.25×106个/ml,以0.2ml/只接种于小鼠右前肢皮下。于第二天开始以上述方法给药,每天一次。5天后,分别称量各组小鼠的体重,剪尾取血检测白细胞数,用乳酸脱氢酶法分别测小鼠脾脏NK细胞活性、腹腔Mφ细胞吞噬活性,用MTT法测脾脏淋巴细胞增殖活性,用RT-PCR法检测脾脏细胞IL-12mRNA的表达。<WP=5>结果: 1. 肿瘤重量比较 接种H22肿瘤细胞株6天后,处死小鼠剥离肿瘤,称量肿瘤重量。NS组和TS组小鼠均有肿瘤生长,肿瘤大小分别为1.313±0.546g、1.321±0.990g,两组小鼠肿瘤重量之间没有统计学差异(P>0.05)。CY组和TS+CY组小鼠中各仅2只小鼠有肿瘤生长。NS组肿瘤重量与CY组比较有显著统计学差异(P<0.01)。2. 体重的比较 于开始给药的前一天和结束给药的第二天分别称量小鼠的体重。NS组小鼠体重与TS组小鼠体重均明显增长,NS组小鼠体重较TS组小鼠体重增长明显(P<0.01);TS+CY组小鼠与CY组小鼠体重均减少,但两组之间无明显差别(P>0.05)。3. 白细胞计数比较 结束给药第二天,剪尾取血,于显微镜下计数小鼠白细胞数。CY组小鼠白细胞数明显低于NS组小鼠(P<0.01)。TS组小鼠白细胞数较NS组小鼠有升高趋势,但无明显统计学差异(P>0.05)。TS+CY组小鼠白细胞数明显高于CY组小鼠(P<0.01)。4. NK细胞杀靶试验比较 用乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞活性,以A值表示。CY组小鼠A比值为0.817±0.324,NS组为1.378±0.369,CY组小鼠NK细胞活性明显低于NS组小鼠NK细胞活性(P<0.01)。TS组小鼠A比值为1.445±0.440,高于NS组,但两组间无明显统计学差异(P>0.05)。TS+CY组小鼠A值为1.332±0.510,明显高于CY组小鼠(P<0.01)。5. Mφ细胞吞噬功能检测 用乳酸脱氢酶释放法测定Mφ细胞吞噬功能,以A值表示。CY组小鼠A比值<WP=6>为0.746±0.329,NS组小鼠A比值为1.383±0.187,CY组小鼠Mφ细胞吞噬活性明显低于NS组小鼠(P<0.01)。TS组小鼠的A比值为1.629±0.392,与NS组小鼠A比值之间无明显统计学差异(P>0.05)。TS+CY组小鼠A比值为1.129±0.280,明显高于CY组小鼠(P<0.01)。6. 脾脏淋巴细胞增殖试验 用MTT法测定脾脏淋巴细胞增殖活性。CY组小鼠淋巴细胞增殖活性明显低于NS组小鼠(P<0.05)。NS组小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性和TS组之间无明显统计学差异(P>0.05)。CY组与TS+CY组小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性之间无明显统计学差异(P>0.05)。7. 脾脏细胞IL-12 mRNA 表达的检测 用PT-PCR法测定IL-12mRNA在脾脏细胞中的表达。CY组小鼠脾脏细胞IL-12mRNA 相对表达量与NS组小鼠脾脏细胞IL-12mRNA 相对表达量分?
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