西兰花细胞系的建立及萝卜硫素代谢调控与提取优化

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十字花科芸薹属蔬菜西兰花中4-甲基亚磺酰丁基硫苷的降解产物萝卜硫素(简称SUL),是迄今为止在蔬菜中发现具有抗癌活力最强的天然活性物质,相对分子量为177.29,分子式为C6H11S2NO,被誉为“防癌、抗癌新秀”风靡世界。本文以西兰花种子和愈伤组织为试验材料,利用植物组织培养技术,研究不同品种和愈伤组织中萝卜硫素含量,考察高浓度盐、重金属、不同碳源及其他外源添加物对愈伤组织生长动态和萝卜硫素合成动力学的影响;并在HPLC检测条件基础上,优化萝卜硫素的提取工艺,获得如下结果:1.经检测不同品种种子中萝卜硫素含量不同,‘玉皇’为最高的品种,含量为942.8μg·g-1,最低的是‘中青9号’含量为172.8μg·g-1。2.筛选出西兰花不同外植体(子叶、胚轴和胚根)的愈伤组织增殖最佳培养基分别为:MS+1.0mg·L-1NAA+1.5mg·L-16-BA;MS+1.5mg·L-1NAA+1.5mg·L-16-BA;MS+1.0mg·L-1NAA+2.0mg·L-16-BA。从不同外植体诱导获得的愈伤组织中萝卜硫素含量从大到小依次为:子叶(840.5μg·g-1)>胚轴(517.1μg·g-1)>胚根(440.3μg·g-1)。3.在一个生长周期内,萝卜硫素的含量呈双峰曲线,第18d达到最大981.3ug·g-1,第27d达到865.4ug·g-1。4.不同外源添加物对西兰花愈伤组织中萝卜硫素含量存在一定的影响,硝酸银、SA、SAS、蔗糖和葡萄糖的添加浓度在10mg·L-1、12mg.g-1、0.4mg·L-1、25g·L-1、35g·L-1时愈伤组织中萝卜硫素均高于对照,而随氯化钠、麦芽糖浓度的增加,愈伤组织增殖量成反比均低于CK;在非生物诱导子、生物诱导子和不同碳源对西兰花愈伤组织中萝卜硫素含量影响中,以6mg·L-1水杨酸、0.4g·L-1抗坏血酸和25g·L-1蔗糖浓度添加水平下,萝卜硫素含量达到最高,分别为359.1μg·g-1、563.6μg·g-1和442.5μg·g-1;其他均抑制萝卜硫素的代谢合成。5.通过响应面试验,用高效液相色谱法测定,以二氯甲烷为萃取剂,萝卜硫素的最佳提取工艺参数为:浸提温度25.7℃,时间2.8h,固液比1g:30mL,浸提3次,萝卜硫素提取率为6.7%。
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