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甜菜夜蛾是一种危害范围不断扩大的农业害虫,成为爆炸性害虫的潜力很大。对于这种趋势,本实验以甜菜夜蛾为对象展开研究,重点探索甜菜夜蛾肠道的免疫防御。本研究在本实验室测定粘质沙雷氏菌PS-1诱导甜菜夜蛾5龄第一天幼虫中肠iTRAQ的基础上,发现在挑选出的差异蛋白中,JNK的表达量明显上调,表明PS-1侵扰诱导了JNK基因的表达。JNK(c-Jun N-末端激酶)是一个结合和磷酸化c-Jun的激酶,JNK信号通路在调控昆虫应激反应和免疫防御中发挥重要作用。本研究通过RT-PCR技术得到甜菜夜蛾JNK基因的转录组序列,利用qRT-PCR技术对甜菜夜蛾JNK基因表达模式分析进行了分析;利用RNAi技术对甜菜夜蛾JNK基因在肠道中的免疫防御功能进行了探讨,并利用qRT-PCR验证了PS-1对甜菜夜蛾肠道内的相关抗菌肽基因和信号通路基因进行表达分析。本文的主要结果如下:1.利用RT-PCR技术得到甜菜夜蛾JNK基因转录组的Unigene序列。其cDNA序列长度为为1914 bp,并分析了与其它物种的同源性。2.分析了JNK基因在甜菜夜蛾体内的表达模式,qRT-PCR结果表明JNK基因在其体内不同时期不同组织中均有表达,幼虫期JNK相对表达量变化较大,而在成虫期表达量较高;在其幼虫血细胞的表达量高于中肠、脂肪体和表皮;在被粘质沙雷氏菌PS-1诱导后JNK极高量表达。3.利用iTRAQ技术对甜菜夜蛾肠道内蛋白样品进行相对定量的蛋白检测,在筛选出差异表达蛋白基础上,选择了JNK、PGRP-LC、Cecropin A2和Lysozyme 1B等11个差异蛋白对应的基因。qRT-PCR结果表明活的粘质沙雷氏菌PS-1和大肠杆菌DH5α均可以诱导甜菜夜蛾高表达这些基因;而热灭活的粘质沙雷氏菌PS-1和大肠杆菌DH5α只能诱导部分基因的高表达,如C type Lectin、Defensin等。4.利用RNAi技术研究甜菜夜蛾JNK基因的免疫防御功能,qRT-PCR结果表明,在甜菜夜蛾血细胞、中肠和脂肪体三个组织中均观察到明显的RNAi效果,但在表皮中未出现明显的RNAi效果;注射dsJNK48 h后抗菌肽基因Cecropin A2、Lebocin 2和Moricin在血细胞中的表达量显著下调;而抗菌肽基因Cecropin A2、Lebocin 2、Lysozyme 1B和Moricin在中肠的表达量显著下调。推测JNK基因对表达量下调的抗菌肽有调控作用。综上所述,本研究基于iTRAQ数据,在mRNA水平上检测了甜菜夜蛾肠道中11个差异表达蛋白对应基因的动态表达;利用RNAi技术在甜菜夜蛾血细胞和肠道中探讨了JNK调控抗菌肽基因Cecropin A2和Moricin的表达。