目的:在前期研究基础上,我们拟通过重物撞击法建立大鼠脊髓损伤模型,应用尿动力学检测脊髓损伤模型大鼠膀胱顺应性,筛选出低顺应性膀胱模型,观察电针对低顺应性膀胱模型大鼠膀胱顺应性的影响,并基于TRPV1通道,探讨电针关元穴调控神经源性低顺应性膀胱顺应性的机制,论证穴位效应的特异性,为目前中医针灸腧穴理论提供实验依据,为神经源性低顺应膀胱的临床选穴治疗提供必要的理论基础。方法:选用SPF级健康成年雌性SD大鼠80只,先将其随机分为两组,假手术组、脊髓损伤后神经源膀胱模型组,分别10只、70只。大鼠饲养12周后,从脊髓损伤后神经源膀胱模型组筛选低顺应性膀胱模型共60只,随机分为低顺应性膀胱模型组10只,TRPV1激活剂组10只、TRPV1抑制剂组10只、电针关元穴组10只、电针非经非穴位组10只、电针关元穴+TRPV1抑制剂组10只。假手术组:只手术暴露未受损的硬脊膜,显露脊髓全宽后,逐层缝合切口肌肉及皮肤;模型组:只造模,不予任何治疗;TRPV1激活剂组:给予膀胱灌注TRPV1激活剂-capsaicin;TRPV1抑制剂组:给予膀胱灌注TRPV1抑制剂-capsazepine;电针关元穴组:给予电针关元穴治疗。采用LH202H型韩氏仪,选用疏密波,频率2Hz/15Hz,强度1mA;电针非经非穴位组:针刺点定位在关元穴水平左侧旁开1cm处,向外15°平刺,电针参数同电针关元组;电针关元穴+TRPV1抑制剂组:给予膀胱灌注TRPV1抑制剂-capsazepine30分钟后再给予电针关元穴治疗,电针参数同电针关元组。各干预组的干预时间为每次30分钟,每天1次,共14天。干预结束后,首先进行各组尿动力学膀胱顺应性数值的指标检测,再依次进行各组膀胱取材和固定,进行指标检测。干预14天后,对各组采用尿动力学方法检测大鼠膀胱顺应性数值;Verhoeff-Van Gieson染色方法检测大鼠膀胱逼尿肌中胶原纤维及弹性纤维的表达和各自占比,电镜方法检测大鼠膀胱逼尿肌超微结构,并比较计算各组逼尿肌细胞线粒体的相对灰度;离体逼尿肌的肌条实验方法检测大鼠逼尿肌的收缩频率和最小收缩张力;免疫组化法检测大鼠膀胱逼尿肌α-SMA的表达;免疫荧光双标法检测大鼠膀胱ICC-LC细胞受体C-kit与p2x5的共表达以及相对表达量;westernblot法检测大鼠膀胱TRPV1、p2x5蛋白表达水平;RT-PCR法检测大鼠膀胱TRPV1、p2x5基因表达水平,检测指标完成后进行统计学分析。结果:1.电针关元穴对模型大鼠尿动力学膀胱顺应性数值的影响:模型组低于假手术组(P<0.01);TRPV1激活剂组明显高于模型组(P<0.01);电针关元穴组明显高于模型组和电针非经非穴组(P<0.01);电针非经非穴组较模型组无明显差异(P>0.05),TRPV1抑制剂组与电针关元穴+TRPV1抑制剂组之间差异,无统计学意义(P>0.05)。2.电针关元穴对模型大鼠逼尿肌粘弹性的影响:模型组胶原纤维占比高于假手术组,弹性纤维占比明显低于假手术组(P<0.01);TRPV1激活剂组胶原纤维占比显著低于模型组,弹性纤维占比显著高于模型对照组(P<0.01);TRPV1抑制剂组胶原纤维占比显著高于模型组,弹性纤维占比显著低于模型对照组(P<0.01);电针关元组的胶原纤维占比明显低于模型组,弹性纤维占比明显高于模型对照组(P<0.01);电针非经非穴组胶原纤维占比与弹性纤维占比较模型组均少许差异,但无统计学意义(P>0.05);电针关元组胶原纤维占比显著低于电针非经非穴组(P<0.01),弹性纤维占比高于电针非经非穴组(P<0.01);电针关元组+TRPV1抑制剂的胶原纤维占比与弹性纤维占比与TRPV1抑制剂组的数据之间比较无统计学意义(P>0.05)。3.电针关元穴对模型大鼠逼尿肌超微结构的影响:12000倍电镜下观察到,假手术组膀胱逼尿肌细胞外形和大小基本一致,并平行排列,细胞间连接一般为中间连接、少量的桥粒以及半桥粒连接,细胞间无明显可见胶原纤维,线粒体与粗面内质网等各种细胞器无水肿、无空泡化以及无钙化;而模型组、TRPV1抑制剂组、非经非穴组、电针关元穴+TRPV1抑制剂组膀胱逼尿肌可见大量的线粒体水肿情况、有的呈现空泡状、线粒体嵴消失、空泡化和钙化表现,粗面内质网显著扩张、水肿和局部空泡化,胶原纤维可见大量增多、方向不一、排列紊乱;电针关元组和TRPV1激活剂组膀胱逼尿肌可见较少的线粒体水肿情况,有的呈现空泡状和线粒体嵴消失、空泡化,以及粗面内质网可见轻度扩张、局部空泡化和水肿,可见少量排列较清楚、方向较一致的胶原纤维。关于逼尿肌线粒体相对灰度值,模型组高于假手术组(P<0.01);TRPV1激活剂组显著低于模型组(P<0.01);TRPV1抑制剂组显著高于模型组(P<0.01);电针关元组明显低于模型组(P<0.01);非经非穴组较模型组均少许差异,但无统计学意义(P>0.05);电针关元组明显低于非经非穴组(P<0.01);TRPV1抑制剂+电针关元组与TRPV1抑制剂组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。4.电针关元穴对模型大鼠逼尿肌收缩性的影响:模型组的最小收缩张力明显高于假手术组,而收缩频率明显低于假手术组(P<0.01);TRPV1激活剂组的最小收缩张力明显较模型组低,而收缩频率明显较模型组高(P<0.01);TRPV1抑制剂组的最小收缩张力明显高于模型组,而收缩频率明显低于模型组(P<0.01);电针关元组的最小收缩张力明显低于模型组,收缩频率明显高于模型组(P<0.01);电针非经非穴组的最小收缩张力和收缩频率较模型组有少许差异,但无统计学意义(P>0.05);电针关元组最小收缩张力显著低于电针非经非穴组(P<0.01),而收缩频率明显高于电针非经非穴组(P<0.01);电针关元组+TRPV1抑制剂的最小收缩张力低于TRPV1抑制剂组,收缩频率高于TRPV1抑制剂组,但差异无统计学意义(P>0.05)。关于大鼠逼尿肌α-SMA阳性表达率,模型组低于假手术组(P<0.01);TRPV1激活剂组明显高于模型组(P<0.01);TRPV1抑制剂组明显低于模型组(P<0.01);电针关元穴组明显高于模型组和电针非经非穴组(P<0.01);电针非经非穴组较模型组无明显差异(P>0.05),电针关元穴+TRPV1抑制剂组高于TRPV1抑制剂组,但差异无统计学意义(P>0.05)。5.电针关元穴对模型大鼠膀胱ICC起搏细胞功能的影响:荧光显微镜下观察到膀胱ICC细胞受体C-kit和P2X5存在共表达,关于ICC细胞及其受体p2x5阳性表达率,模型组低于假手术组(P<0.01);TRPV1激活剂组明显高于模型组(P<0.01);TRPV1抑制剂组明显低于模型组(P<0.01);电针关元穴组明显高于模型组和电针非经非穴组(P<0.01);电针非经非穴组较模型组无明显差异(P>0.05),TRPV1抑制剂组与电针关元+TRPV1抑制剂组之间差异,无统计学意义(P>0.05)。6.电针关元穴对模型大鼠膀胱TPRV1通道相关因子的影响:关于大鼠膀胱TRPV1、p2x5蛋白灰度比值:模型组大鼠膀胱TRPV1蛋白灰度比值显著低于假手术组(P<0.01);TRPV1激动剂组大鼠膀胱TRPV1蛋白灰度比值高于模型组(P<0.01);TRPV1抑制剂组大鼠膀胱TRPV1蛋白灰度比值明显低于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱TRPV1蛋白灰度比值高于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱TRPV1蛋白灰度比值高于电针非经非穴组(P<0.01);电针非经非穴组大鼠膀胱TRPV1蛋白灰度比值高于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);电针关元穴+TRPV1抑制剂组大鼠膀胱TRPV1蛋白灰度比值低于TRPV1抑制剂组,但差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠膀胱p2x5蛋白灰度比值低于假手术组(P<0.01);TRPV1激动剂组大鼠膀胱p2x5蛋白灰度比值高于模型组(P<0.01);TRPV1抑制剂组大鼠膀胱p2x5蛋白灰度比值低于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱p2x5蛋白灰度比值高于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱p2x5蛋白灰度比值高于电针非经非穴组(P<0.01);电针非经非穴组大鼠膀胱p2x5蛋白灰度比值高于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);电针关元穴+TRPV1抑制剂组大鼠膀胱p2x5蛋白灰度比值低于TRPV1抑制剂组,但差异无统计学意义(P>0.05)。关于大鼠膀胱TRPV1、p2x5基因水平:模型组大鼠膀胱TRPV1的mRNA扩增倍数低于假手术组(P<0.01);TRPV1激动剂组大鼠膀胱TRPV1的mRNA扩增倍数高于模型组(P<0.01);TRPV1抑制剂组大鼠膀胱TRPV1的mRNA扩增倍数低于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱TRPV1的mRNA扩增倍数高于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱TRPV1的mRNA扩增倍数高于电针非经非穴组(P<0.01);电针非经非穴组大鼠膀胱TRPV1的mRNA扩增倍数低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);TRPV1抑制剂+电针关元穴组大鼠膀胱TRPV1的mRNA扩增倍数低于TRPV1抑制剂组,但差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠膀胱p2x5的mRNA扩增倍数低于假手术组(P<0.01);TRPV1激动剂组大鼠膀胱p2x5的mRNA扩增倍数高于模型组(P<0.01);TRPV1抑制剂组大鼠膀胱p2x5的mRNA扩增倍数低于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱p2x5的mRNA扩增倍数高于模型组(P<0.01);电针关元穴组大鼠膀胱p2x5的mRNA扩增倍数高于电针非经非穴组(P<0.01);电针非经非穴组大鼠膀胱p2x5的mRNA扩增倍数低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);电针关元穴+TRPV1抑制剂组大鼠膀胱p2x5的mRNA扩增倍数低于TRPV1抑制剂组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.对于脊髓损伤后低顺应性膀胱大鼠,其膀胱逼尿肌的粘弹性、细胞超微结构、收缩性、icc起搏细胞数量、TRPV1通道等因素均参与介导了脊髓损伤后低顺应性膀胱发生的病理过程。2.TRPV1通道激活剂能提高膀胱机械感受功能,促进提高ICC起搏细胞功能,提高膀胱逼尿肌粘弹性、收缩性,改善逼尿肌细胞超微结构病理状态和逼尿肌动能,改善膀胱顺应性。TRPV1通道抑制剂作用效应相反。3.电针关元穴有类似TRPV1通道激活剂作用效应,电针关元穴激活TRPV1通道,上调TRPV1和ICC细胞受体P2X5蛋白和基因表达水平,提高ICC表达量,激发ICC细胞生物效应,提高α-SMA等因子表达,从而提高尿动力学膀胱顺应性,而电针非经非穴无类似作用效应,穴位效应具有特异性。4.ICC起搏细胞功能是膀胱感觉传入与逼尿肌收缩运动之间的关键连接桥梁,电针关元穴可能通过调控TRPV1通道,提高膀胱机械感受功能,促进提高ICC起搏细胞功能,从而加强膀胱机械感觉传入与逼尿肌收缩运动之间的信号传导联系,提高逼尿肌收缩性和逼尿肌动能,改善逼尿肌细胞超微结构病理状态以及粘弹性等生理特性,从而改善脊髓损伤后低顺应性膀胱大鼠膀胱顺应性。