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毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳(High performance capillary electrophoresis,HPCE),是20世纪80年代在全世界范围内发展起来的一种新型分离分析技术,因分离效率高、分析速度快、分离模式多、所需样品少、应用范围广、自动化程度高等特点,在生命科学、生物技术、临床医学、药学分析和环境科学等领域显示了极其重要的作用。芯片毛细管电泳(Microchip capillary electrophoresis,MCE),通过微型化和集成化,把样品前处理、反应、分离、检测等集成在微芯片上,被认为是当代分析科学最具有活力的前沿研究课题之一。
本文利用毛细管电泳和芯片毛细管电泳技术对药物中的有效成分进行分析,包括以下6章,主要内容如下:
1.介绍了毛细管电泳和芯片毛细管电泳的发展简史和应用现状,重点评述了它们在药物分析中的应用研究进展。
2.建立了毛细管电泳非接触式电导法测定紫草药材中左旋紫草素含量的分析方法。以融硅毛细管(150 μm×70.0 cm)为分离柱,研究了缓冲液的种类、浓度、添加剂种类与添加量、分离电压和进样量等因素对分离和检测的影响,优化选择1.0 mmol/L H<,3>BO<,3>-3.0 mmol/L三乙胺缓冲液为电泳介质,分离电压18.0 kV,可实现分离检测。在优化条件下左旋紫草素线性范围为10.0μg/mL-250μg/mL,线性相关系数为0.996,检出限为5.0μg/mL(S/N=3)。两批样品不同浓度添加水平的日内和日问RSD均小于4%,两批药材的加标回收率分别:93.9%-97.4%和93.1%-101%。该方法简便、快速、灵敏度高,可以用于紫草药材的质量控制。
3.建立了毛细管电泳非接触式电导法测定复方制剂中硝酸咪康唑含量的分析方法。以融硅毛细管(150μm×60.0 cm)为分离柱,研究了缓冲液的种类、浓度、添加剂种类与添加量、分离电压和进样量等因素对分离和检测的影响,优化选择3.O mmol/L乳酸-10%乙醇缓冲液为电泳介质,分离电压20.0kV,可实现分离检测。在优化条件下硝酸咪康唑线性范围为20.0gg/mL-900μg/mL,线性相关系数为0.999,检出限为1.Oμg/mL(S/N=3)。两种制剂不同浓度添加水平的日内和日RSD均小于3%,两种制剂的加标回收率分别:94.9%-101%和95.3%-99.1%。该方法高效、灵敏,可以用于硝酸咪康唑相关制剂的质量控制。
4.建立了毛细管电泳非接触式电导法分离检测三种复方制剂中醋酸洗必泰的分析方法。以融硅毛细管(150μm×60.0 cm)为分离柱,研究了缓冲液的种类、浓度、添加剂种类与添加量、分离电压和进样量等因素对分离和检测的影响,优化选择0.5 mmol/LHAc-3.O mmol/LNaAc缓冲液为电泳介质,分离电压15.OkV,可实现口炎康漱口液、妇炎洁栓、洁阴抗菌洗液三种复方制剂中醋酸洗必泰的分离和检测。在优化条件下醋酸洗必泰线性范围为10.0 gg/mL-200μg/mL,线性相关系数为0.998,检出限为5.0μg/mL(S/N=3)。三种样品不同浓度添加水平的日内和日间RSD均小于5%,加标回收率分别为:口炎康漱口液93.2%-98.7%、妇炎洁栓剂91.2%-93.5%、沽阴抗菌洗液99.8%-103%。该方法简便、快速、灵敏度高,为这些制剂的质量控制提供了一种有效方法。
5.在国内首次研制了一种芯片毛细管电泳非接触式电导检测装置。此装置具有体积小、结构简单、操作方便等优点。芯片与电极板之间相互独立,两者的更换和清洗等操作非常方便。检测可在较低的激发电压(20-110 V)和在较低的激发频率(40-65kHz)下进行。检测电极和溶液之间隔离,不仅避免了电极的污染中毒和电极附近气泡的产生,而且消除了分离高压的干扰。利用改仪器对钾离子进行测定,检出限(LOD)为lO gmol/L。并实现了对4种氨基酸和3种神经递质的分离和检测。
6.采用自行研制的芯片毛细管电泳非接触式电导检测装置,对九种中药和两种制剂中的主要生物碱成分进行了测定研究。实验条件:激发频率60 kHz,激发电压60 V(Vp-p),缓冲溶液20mmol/L,MES-20mmol/LIIis,进样电压0.5kV,进样时间10s,分离电压3.O kV,通道有效分离长度90mm。在上述相同的条件下实现了九种药材和两种制剂中主要生物碱的分离测定:(1)黄连、黄柏、功劳木(十大功劳)中的小檗碱和药根碱,小檗碱片中的小檗碱,京制牛黄解毒片中的小檗碱和药根碱的测定;(2)苦参和山豆根中的苦参碱和氧化苦参碱的分离检测;(3)麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱的分离测定;(4)山慈姑叶和果中的秋水仙碱的测定;(5)益母草中水苏碱的检测;(6)青风藤中青藤碱的检测;(7)防己中的粉防己碱和防己诺林碱的分离测定。为这些药物中有效成分的测定提供了超高速(小于50 s)、灵敏、简便、廉价的一种的方法。