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目的:(1)基于HPLC方法鉴定藿苏养胃复方的主要中药单体成分,利用网络药理学方法预测并筛选藿苏养胃复方抑制胃癌的关键作用靶点。(2)基于体外细胞及体内动物实验,探究藿苏养胃复方抑制胃细胞癌生长的作用机制。为藿苏养胃复方在临床治疗胃癌应用中提供积极的理论支持。方法:(1)基于Drug Bank、TCMSP、TCMIP、Pub Chem等公共数据库,检索复方组成,对获得的主要单体成分的靶标及疾病信息进行预测筛选,利用Cytoscape软件构建藿苏养胃复方多成分对应多靶点以及多疾病的网络关系模型。利用IPA数据库进行生物功能分析,构建基于KEGG pathway及对应靶点的调控网络。(2)采用HPLC技术对藿苏养胃复方的主要成分进行鉴定,基于口服生物利用度(OB≥0.3)及类药性(DL≥0.18),筛选藿苏养胃复方的有效成分,并利用网络靶点多组分协同识别算法(NIMS)对有效成分进行协同性分析。进一步利用分子对接(docking)技术对有效成分的作用靶点进行预测。构建成分-靶点网络。计算生物网络的节点度(Degree centrality,DE)、聚类系数(Clustering coefficients,CC)、拓扑系数(Topological coefficients,TP)、中介中心性(Betweenness centrality,BC)等参数,筛选藿苏养胃复方治疗胃癌相关的重要节点。(3)运用MTT检测法对藿苏养胃复方作用于胃癌细胞N87、HGC27、BGC823、SGC-7901及AGS胃癌细胞株的体外抑制情况进行实验研究,对细胞活性的影响及其增殖或抑制状态进行检测。(4)选取抑制效果最好的N87胃癌细胞株进行藿苏养胃复方体内抑制实验,在Balb/c小鼠上建立N87荷瘤小鼠肿瘤模型。随机分为两组(n=10)肿瘤模型组和用药组,根据成人临床剂量和小鼠体表面积转换公式,推算小鼠给药剂量为藿苏养胃复方原液200μl,每天灌胃一次。按标准流程测量小鼠的肿瘤体积及体重。给药26天,处理实验小鼠,取血,分离肿瘤组织、肾脏,肝脏等,计算肿瘤增殖率。HE病理检测,运用Ki67检测对肿瘤细胞的增殖状态,TUNEL染色检测肿瘤细胞的凋亡状态。(5)收集模型组及用药组小鼠的肿瘤组织,分别采用q RT-PCR和Western blot方法对上述网络药理学获得的重要靶点进行分子生物学验证。结果:(1)通过网络药理学研究分析预测藿苏养胃复方,共获得350种单体组分、182个药物作用靶点、4346个单体-靶点对及348类疾病。富集分析结果显示藿苏养胃复方主要通过磷脂酶C激活G蛋白偶联受体信号转导通路、腺苷酸环化酶激活肾上腺素能受体信号通路、钙信号通路、血清素能突触,以及CAMP信号通路、CGMP-PKG信号通路等与癌症相关的信号通路发挥作用。(2)HPLC检测结果显示藿苏养胃复方主要包括160种单体成分,在OB≥0.3及DL≥0.18条件下,共获得48种有效成分。NIMS结果显示这48个有效成分具有较高的药物协同性。分子对接结果显示,48个有效成分与56个靶点高度相关。利用上述获得的有效成分及预测的靶点构建成分-靶点网络,计算生物网络的节点度、聚类系数、拓扑系数、中介中心性、接近中心性等参数,筛选藿苏养胃复方治疗胃癌的5个核心靶点,分别为NOS2、PTGS2、EGFR、CASP1和ABCB1。(3)藿苏养胃复方抑制胃癌细胞的体外实验中,除SGC-7901细胞外,其余四种胃癌细胞包括N87、HGC27、AGS、BGC823均有明显抑制作用,其中N87效果最好。暗示了藿苏养胃复方对这四种胃癌细胞可能存在共同的调控途径。(4)藿苏养胃复方抑制N87荷瘤小鼠肿瘤生长体内实验表明,藿苏养胃复方抑制胃癌生长效果显著,HE、Ki67、TUNEL等结果表明藿苏养胃复方对肿瘤具有明显的抑制作用。(5)q RT-PCR结果表明,5个核心靶点中由4个在肿瘤组和藿苏养胃复方组的表达结果差异显著,其中ABCB1呈现高表达,CASP1呈现低表达,EGFR呈现低表达,NOS2呈现低表达,但PTGS2没有明显差异。Western blot验证结果显示上述4个靶点的蛋白表达水平与q RT-PCR结果趋势一致,说明ABCB1、CASP1、NOS2、NOS2这4个核心靶点可能是藿苏养胃复方治疗胃癌的潜在作用靶点。结论:网络药理学分析结果显示藿苏养胃复方其可能通过磷脂酶C激活G蛋白偶联受体信号转导通路、腺苷酸环化酶激活肾上腺素能受体信号通路等与癌症相关的信号通路发挥作用。HPLC检测结果显示对藿苏养胃复方含有160个主要成分,按OB值≥0.3及DL值≥0.18为条件共筛选出48个中药有效成分。分子对接结果显示48个主要成分与56个靶点密切相关。体外细胞实验表明藿苏养胃复方可有效抑制N87、HGC27、BGC823、SGC-7901及AGS胃癌细胞的生长,其中N87细胞抑制效果最好。体内动物实验表明藿苏养胃复方可抑制N87荷瘤小鼠的肿瘤生长。分子生物验证结果表明藿苏养胃复方可能是通过ABCB1、CASP1、NOS2、NOS2这4个核心靶点发挥其抗肿瘤作用。