问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株＃56601(强毒株)的全基因组测序工作已经完成。在基因诠释的基础上, 国内外学者相继鉴定出在问号钩端螺旋体赖株染色体上有众多溶血素编码基因，并认为溶血素可能和钩端螺旋体致病相关。LA0202基因是位于问号钩端螺旋体赖株大染色体上类噬菌体片段上的一个基因，运用生物信息学方法分析发现，其蛋白质一级结构及二级结构和大肠埃希菌K12株成孔蛋白类溶血素E（ Hemolysin E)及化脓性链球菌MGAS315株中推测的孔形成多肽具有一定的相似性，推测其可能又是一个和钩端螺旋体致病相关的溶血素基因。因此，本实验主要对LA0202基因进行鉴定，并对其功能性进行分析，为进一步探究问号钩端螺旋体的致病机制奠定基础。 首先将LA0202基因克隆到pET28b(+)原核表达载体中并成功在体外表达纯化了该蛋白。 RT-PCR和Western-blot实验证明LA0202基因在问号钩端螺旋体赖株中可以转录和表达。然后对此表达的蛋白进行了体外溶血活性、溶血机制及细胞毒性等一系列实验研究。 结果如下：（1）溶血活性实验显示：LA0202 蛋白具有溶血活性：通过血平板热-冷孵育法观察到清晰的β-溶血环；通过透射电镜观察法看到溶血素作用后的绵羊红细胞细胞质染色不均一，细胞内部有空泡出现，细胞膜不完整，局部已出现破裂，导致细胞内容物开始外泄。（2）溶血机制研究表明：不同浓度的渗透压保护剂PEG加入后对溶血素LA0202的溶血活性均有明显抑制作用；经加热处理后溶血素LA0202的溶血活性完全丧失；金属阳离子Mg2+﹑Mn2+﹑Ca2+，蛋白酶抑制剂EDTA和PMSF对溶血素的溶血活性影响不大，因此初步推测LA0202为成孔蛋白类溶血素。（3）细胞毒性研究表明：LA0202蛋白对肝细胞具有明显的细胞毒性作用，通过倒置显微镜、透射电镜、扫描电镜观察和流式细胞仪检测显示，溶血素LA0202作用正常人肝细胞L-02后呈现出显著细胞毒性，肝细胞不仅显现细胞坏死特征而且还同时显现细胞凋亡特征，并且肝细胞发生凋亡的比例随着溶血素作用时间的延长而大幅升高，在溶血素作用24小时后肝细胞发生凋亡比率为33.11％ ，作用48小时后肝细胞发生凋亡比率上升至52. 43％。 根据以上实验，推断LA0202为问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株中又一新发现的具有致病作用的成孔蛋白类溶血素，并且可能和钩端螺旋体病严重病症的产生有着密切关系。