【摘 要】
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在本研究中,针对目前未获得我国农业部《转基因生物安全证书(进口)》的转基因棉花品系GHB119和T304-40,在基于锁核酸(LNA)技术的基础上建立了同时定量检测转基因棉花品系GHB1
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在本研究中,针对目前未获得我国农业部《转基因生物安全证书(进口)》的转基因棉花品系GHB119和T304-40,在基于锁核酸(LNA)技术的基础上建立了同时定量检测转基因棉花品系GHB119、T304-40、棉花内源酰基载体蛋白1基因(ACPl)以及GHB119插入的外源抗虫基因Cry2Ae的实时荧光四重PCR方法。并以单重实时荧光PCR作对照,对建立的实时荧光四重PCR定量检测方法进行了测试。测试结果表明,该方法高度特异于转基因棉花品系GHB119和T304-40以及外源抗虫基因Cry2Ae;三个目标片段的检测下限(LOD)均低于25拷贝品系基因组DNA；定量下限(LOQ)均低于50拷贝的品系基因组DNA。同时,在此基础上本研究构建了适用于10种转基因棉花(MON531281-24-236、3006-210-2、MON15985、GBH614、MON1445、GHB119、LLcotton25、 MON88913和T304-40)品系特异性检测的质粒标准分子pUC57,并对其作为阳性标准物质在实时荧光PCR检测中的适用性进行了本实验室内部的验证。验证结果显示,构建的质粒标准分子pUC57可以替代常规基质标准物质用于对转基因棉花实时荧光PCR定性和定量检测分析。另外,本研究还采用数字PCR技术(ddPCR)针对已构建完成的适用于转基因油菜品系RT73的品系特异性检测的质粒标准分子pEASY-RT73中的3个目标片段进行了进一步的片段定值测试,并对引物和探针进行了筛选和优化,增强了pEASY-RT73质粒标准分子作为阳性物质定量检测转基因油菜品系RT73成分的可靠性和稳定性。
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