奶牛乳房炎是奶牛的常见病和多发病，是造成奶牛业损失最严重的疾病之一。90％以上的乳房炎都是由病原微生物引起的，因此，使用抗菌药物是防治奶牛乳房炎的主要方法，但伴随着抗菌药物在世界范围内的大量使用及滥用，导致细菌出现严重的耐药性。因此，对临床菌株进行药物敏感性试验及耐药性分子流行病学研究，不仅对防治奶牛乳房炎是重要的，而且有利于控制耐药菌株的产生和传播。 本研究首先对内蒙古呼和浩特市和上海市两地区奶牛乳房炎进行调查，并对分离的大肠杆菌进行药物敏感性测定和血清型鉴定。结果显示，两地区隐性乳房炎的发病率分别为55.75％和58.57％，乳区发病率分别为36.49％和128.67％：临床型乳房炎的发病率分别为15.86％和1.78％，乳区发病率分别为6.59％和0.51％。对临床分离出的80株大肠杆菌进行药物敏感性试验，结果显示，90％以上菌株对阿米卡星、多粘菌素、头孢噻呋、氟苯尼考敏感；80％以上对庆大霉素、卡那霉素敏感；70％以上对氟喹诺酮类敏感；对氨苄青霉素、阿莫西林、土霉素、链霉素、磺胺存在很高的耐药率。分离菌株最少耐受2种药物，最多耐受16种药物。分离到的大肠杆菌优势血清型为O<,142>、O<,93>、O<,148>，O<,68>、O<,18>。 在获得菌株对20种抗菌药物耐药谱的基础上，设计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合子简并引物扩增菌株的整合酶基因并结合内切酶限制性片段长度多态性分析，调查菌株携带的各型整合子，然后进一步扩增菌株整合子的基因盒插入区，测序分析其携带的基因盒。结果发现，80株奶牛乳房炎大肠杆菌中37株检出Ⅰ型整合子(检出率46.25％)，未检出Ⅱ型和Ⅲ型整合子。Ⅰ型整合子阳性菌中31株扩增出3种不同大小的基因盒插入区片段，6株未扩增出基因盒插入区片段；插入的基因盒主要是二氢叶酸还原酶基因(dfr)和氨基糖甙类抗生素耐药基因(aadA)，最主要的基因盒排列为dfrA177-aadA5。分析表明，Ⅰ型整合子集中分布在耐受7种抗菌药物以上的菌株中，与菌株的多重耐药性高度相关，而菌株Ⅰ型整合子携带的耐药基因盒与其耐药谱缺乏对应关系。 本研究采用了美国临床实验室标准化委员会2005年推荐的纸片确认方法对80株大肠杆菌进行了超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测及耐药性分析，并采用聚合酶链反应(PCR)技术对ESBLs基因进行检测和初步分型。结果显示，内蒙古呼和浩特市检测出6株产ESBLs菌株，阳性率为10.34％，上海市未检出产ESBLs菌株。在ESBLs阳性菌株中，有1株菌携带TEM-1基因，有1株携带了CTX-M-14型基因，而3株同时携带了TEM-1型和CTX-M-14型2种基因，只有1株菌未检出上述基因。6株ESBLs菌株中有5株整合子PCR扩增阳性，阳性率83.33％。结果显示：的ESBLs菌株多表现为多重耐药，对各种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株。 综上所述，本研究通过对两地区奶牛乳房炎大肠杆菌的耐药性比较和分子流行病学的研究，初步揭示了其耐药性以及整合子机制在多重耐药中的作用，为指导临床合理应用抗菌药物，预防和控制耐药菌及耐药基因的传播提供了科学依据。