【摘 要】
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生长受阻和发育障碍综合症(Runting and Stunting Syndrome,RSS)的鸡,俗称“僵鸡”,在临诊上主要表现为:生长停滞、发育受阻、个体矮小瘦弱,且RSS鸡易出现在性连锁矮小(sex-linked dwarf,SLD)鸡中。而SLD鸡中出现的RSS鸡在临床症状上与人线粒体疾病十分相似。因此,我们推测此类RSS鸡可能由线粒体功能异常引起。本研究首先选择RSS鸡、SLD鸡和正常鸡
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生长受阻和发育障碍综合症(Runting and Stunting Syndrome,RSS)的鸡,俗称“僵鸡”,在临诊上主要表现为:生长停滞、发育受阻、个体矮小瘦弱,且RSS鸡易出现在性连锁矮小(sex-linked dwarf,SLD)鸡中。而SLD鸡中出现的RSS鸡在临床症状上与人线粒体疾病十分相似。因此,我们推测此类RSS鸡可能由线粒体功能异常引起。本研究首先选择RSS鸡、SLD鸡和正常鸡进行肝脏病理学分析,并对其肝脏中氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OXPHOS)复合物的酶活性和线粒体功能进行测定。结果发现:RSS鸡肝脏中表现出脂肪变性、肝小叶结构紊乱、脂滴增多和线粒体数量减少的症状,并且RSS鸡和SLD鸡肝脏中OXPHOS复合物的酶活性降低、线粒体结构和功能发生改变,但RSS鸡较SLD鸡的受损更严重。然后,我们在DF-1细胞中干扰了GHR的表达。结果发现:干扰GHR基因后,细胞中线粒体生物合成的关键调节因子与线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)编码的OXPHOS复合物基因的表达量下调,并且OXPHOS复合物的酶活性降低、线粒体结构和功能发生改变。最后,我们选择TWNK作为候选基因对RSS的分子机制进行探讨。结果发现:在矮小型品系N301群体中,出现的RSS鸡肝脏中存在隐性遗传的TWNK突变c.409G>A(p.Ala137Thr)和mt DNA耗竭。为弄清该TWNK突变和mt DNA耗竭的关系,我们通过多种生物信息学方法预测该突变对其结构和功能的影响,并且在LMH和DF-1细胞中过表达TWNK wt和TWNK A137T以研究它们对mt DNA复制的影响。结果发现:突变的氨基酸Thr137可能影响Twinkle引物酶结构域中连接区域的功能,并可能进一步影响mt DNA的复制导致mt DNA耗竭。在LMH和DF-1细胞中过表达TWNK wt可以增加mt DNA含量。反之,在LMH和DF-1细胞中过表达TWNK A137T会导致mt DNA耗竭。综上所述,GHR基因对维持鸡线粒体的正常功能起到至关重要的作用。而TWNK基因错义突变c.409G>A(p.Ala137Thr)导致的mt DNA耗竭可能会在GHR变异诱导的线粒体损伤的基础上,进一步引起RSS的出现。我们认为TWNK基因突变所引起的线粒体DNA耗竭是导致矮小鸡生长受阻的原因之一,但GHR基因突变与TWNK基因突变之间的相互作用机制不明。
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