谷氨酰胺具有低温保护猪精子的能力,特别是通过提高解冻后精子活力来表现。甘油作为渗透性冷冻保护剂可保护精子免受低温造成的冷冻损伤,被广泛应用于各种动物精子的冷冻保存,但甘油也有不利的影响,会对精子具有一定毒性作用。本试验用不同浓度的谷氨酰胺(Gln)替代部分甘油作为猪精液冷冻保护剂,投入液氮保存4周后解冻,对冻融松辽黑猪精子的精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、膜脂质紊乱、鱼精蛋白缺乏及体外受精等技术环节进行了研究,因此试验分为实验一:3%甘油对照组(未添加Gln),实验二:2%甘油(未添加Gln)处理组,实验三:2%甘油+Gln(20 mM、40 mM、80 mM、100 mM)处理组。旨在探索用谷氨酰胺(Gln)替代部分甘油对冻融猪精子的影响,为猪精液冷东保存及商业化生产提供技术支撑。试验结果如下:1.与 3%甘油对照组(44.28±2.01、47.94±2.13、46.16±2.85、49.18±1.63、46.11±3.35)相比,2%甘油处理组(31.43±2.19、43.71±2.27、32.21±1.82、33.18±1.83、32.47±1.61)精子活力、质膜完整性、顶体完整性、活率和线粒体膜电位均显著下降(P<0.05),2%甘油+80 mMGln 处理组(42.94±2.99、50.99±2.19、48.25±1.24)精子活力、质膜完整性和顶体完整性显著提高(P<0.05),2%甘油+100 mM Gln处理组(52.98±2.63、53.82±2.84、52.08±2.26、55.12±3.08、54.72±1.77)精子活力、质膜完整性、顶体完整性、活率和线粒体膜电位均显著提高(P<0.05);2.与3%甘油对照组(8.83±0.15)相比,2%甘油处理组(8.30±0.20)活精子细胞膜脂质未紊乱水平显著下降(P<0.05),用谷氨酰胺替代部分甘油后活精子细胞膜脂质未紊乱水平均显著提高(P<0.05),且当谷氨酰胺为100 mM时差异最显著(11.83±0.20);3.与3%甘油对照组(19.07±1.87)相比,2%甘油处理组(22.3±1.78)精子鱼精蛋白缺乏水平显著上升(P<0.05),2%甘油+100 mMGln处理组(11.80±1.77)精子鱼精蛋白缺乏水平均显著下降(P<0.05);4.与3%甘油对照组(1.11±0.33)相比,2%甘油处理组(0.93±0.10)和2%甘油+100 mM Gln处理组(1.11±0.34)之间精子酪氨酸磷酸化水平无显著差异(P＞0.05);5.与3%甘油对照组(56.24±5.51)相比,2%甘油处理组(40.58±8.34)精子体外受精卵裂率显著下降(P<0.05),2%甘油+100 mM Gln处理组(77.83±5.57)精子体外受精卵裂率显著上升(P<0.05)。以上结果表明,谷氨酰胺替代部分甘油作为猪精子冷冻保护剂可显著提高精子的活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、活率和膜脂质紊乱水平,尤其当甘油适宜浓度降低至2%并补充谷氨酰胺的浓度为100 mM时。本研究优化了猪精液冷冻保护剂体系,将为猪精液的冷东保存提供商业价值。