法医DNA常量检材Chelex-100提取法研究

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随着被称为“法医DNA第二代遗传标记”的STR多态性被发现,STR-PCR技术已逐渐成为法医DNA检验的主流方法,国内外科研力量主要集中在痕量和微量DNA检材的现场提取、纯化等方面,对常量检材检验的重视不够,常量检材检验的效率、检验成功率等长期处于因人而异的状况。DNA提取中常用的几大方法即Chelex-100法、有机法(饱和酚法)、二氧化硅法(硅珠法、磁珠法)、氢氧化钠法、盐析法虽然各有优势,但由于法医DNA检验对提取方法的最基本要求是原始检材需求量小、提取的DNA保存时间长,同时,一般尽量选择提取时间短、提取的DNA质量高、试剂成本低、操作简单的方法。因此,Chelex-100法已经取代了有机法成为法医DNA实验室常量检材最主流的提取方法。在法医DNA检验中,由于扩增和电泳都是采用商用扩增试剂盒以及自动化电泳仪器,人为因素在这两个环节中影响不大,DNA提取就成为了DNA检验的关键环节,提取液中DNA的数量和质量直接影响最终检验结果。本研究的目的就是探讨法医实验室的常量检材各种常见载体的提取量以及Chelex-100提取过程中各参数的参考范围。本文通过一系列对照实验,结合DNA定量仪读数和ABI分析仪3130xl,确定了DNA提取过程中的最佳提取体积(100ul)、Chelex-100最低浓度(5%)和蛋白酶K最小加入量(5ul/100ul)、能保证DNA充分释放和解链的56℃消化时间(45分钟)和98℃变性时间(8分钟)。同时,通过提取同一载体不同量检材的对照实验,提供了一个常量检材法医DNA实验室各种常见载体的提取检材量的参考值。
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