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目的:本项研究通过检测纳米三氧化二铁对神经细胞的毒性以及携带siRNA后对靶基因的沉默效果来验证纳米三氧化二铁能否成为siRNA的有效载体。
方法:1.取孕15天左右SD大鼠的胎鼠为材料体外混合培养神经细胞，用不同浓度的Fe2O3-NP培养液对神经细胞作用不同时间;2.用光学显微镜观察和普鲁士蓝实验证实纳米三氧化二铁是否可以通过神经细胞的细胞膜;3.利用光学显微镜对纳米三氧化二铁作用后的神经细胞进行细胞形态学观察，对比各组细胞的形态变化;利用LDH实验和MTT实验检测神经细胞的增殖与凋亡情况以反映纳米三氧化二铁对神经细胞的毒性;4.用多聚赖氨酸修饰后的纳米三氧化二铁转运siRNA到靶细胞进行靶基因沉默;5.利用WESTERNblott和免疫荧光技术检测靶基因的沉默效率。
结果:1）光学显微镜下可以看到纳米三氧化二铁进入神经细胞并出现团聚现象
2)普鲁士蓝染色后神经细胞内被染成蓝色。
3)光学显微镜下可以看到纳米三氧化二铁进入神经细胞后神经细胞形态无明显改变;
4)MTT实验和LDH实验证实实验条件下的纳米三氧化二铁对体外培养的神经细胞的增殖和凋亡无明显影响;
5)荧光显微镜下观察PLL-Fe2O3/SiO2-NP可以将siRNA顺利转运到靶细胞内
6)WESTERN和免疫荧光检测显示PLL-Fe2O3/SiO2-NP转运siRNA进行靶基因沉默后靶蛋白明显减少。
结论:1.纳米三氧化二铁可以顺利通过神经细胞膜进入细胞内;2.纳米三氧化二铁对体外培养的神经细胞无明显毒性;3.PLL-Fe2O3/SiO2-NP能够有效沉默靶基因。推测纳米三氧化二铁可能成为有效的siRNA转运载体。