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背景:骨肉瘤是一种原发性恶性骨肿瘤,好发于20岁以下的青少年或儿童,是严重威胁儿童和青少年生命的恶性肿瘤。特别是对于发生肿瘤转移或复发的骨肉瘤患者,现有治疗手段往往难以奏效。而关于肿瘤微环境(the tumor microenvironment,TME)的研究无疑给骨肉瘤的治疗开辟了新方向。肿瘤微环境主要由肿瘤细胞、细胞间质、血管、浸润的炎细胞等构成。近些年的研究发现TME中浸润的多种免疫细胞与肿瘤患者的不良预后具有显著相关性,其中肿瘤组织中浸润的中性粒细胞被称为肿瘤相关性中性粒细胞(tumor-associated neutrophils,TANs)。许多研究都表明,中性粒细胞在多种类型的肿瘤组织中存在浸润,且中性粒细胞在肿瘤组织中的出现与不良预后具有显著的相关性。目的:1、研究骨肉瘤中是否有肿瘤相关中性粒细胞的浸润,探索肿瘤相关中性粒细胞与骨肉瘤分期及转移的关系。2、探索共培养体系中肿瘤相关中性粒细胞与骨肉瘤细胞的相互作用,及骨肉瘤细胞生物学特性的变化。3、研究肿瘤细胞生物学特性变化的原因,用细胞因子芯片检测共培养后发生变化的细胞因子。4、挑选共培养后明显改变的细胞因子,验证其对对骨肉瘤细胞生物学特性的影响。方法:1、收集骨肉瘤临床标本,用HE和免疫组化染色研究中性粒细胞浸润情况,并分析肿瘤相关中性粒细胞与骨肉瘤分期及转移的关系。2、使用xCELLigence RTCA DP多功能实时无标记细胞分析仪监测共培养中不同比例中性粒细胞对骨肉瘤SOSP-9607细胞迁移能力的影响。3、通过细胞因子芯片检测中性粒细胞与人骨肉瘤细胞SOSP-9607共培养后细胞因子的变化情况。Western Blot技术验证细胞因子的表达。4、用Transwell迁移实验和侵袭实验证实细胞因子对骨肉瘤细胞SOSP-9607迁移及侵袭能力的作用。结果:1、HE和免疫组化染色均显示骨肉瘤内存在中性粒细胞的浸润,而且其浸润程度与骨肉瘤的分期及临床转移显著相关。2、骨肉瘤细胞SOSP-9607和中性粒细胞共培养后骨肉瘤细胞的迁移能力明显增强。3、骨肉瘤细胞SOSP-9607和中性粒细胞共培养后IL-6、IL-1β、Angiogenin、IGFBP-1等多种细胞因子发生了改变,western blot证实升高的IL-6是由肿瘤细胞刺激中性粒细胞分泌。4、IL-6可以提升骨肉瘤细胞的迁移及侵袭能力,下调内源性IL-6表达后,骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力降低。结论:1、存在中性粒细胞在骨肉瘤组织内浸润的情况,且中性粒细胞浸润程度与骨肉瘤的分期及临床转移显著相关。2、肿瘤相关中性粒细胞可以增强骨肉瘤细胞SOSP-9607的迁移能力。3、IL-6、IL-1β、Angiogenin、IGFBP-1等多种细胞因子可能是肿瘤相关中性粒细胞增强骨肉瘤细胞SOSP-9607迁移能力的原因。4、肿瘤相关中性粒细胞与骨肉瘤细胞SOSP-9607的作用是相互的,肿瘤细胞或其代谢产物也可刺激中性粒细胞,使其蛋白表达产生改变。5、IL-6可以提升骨肉瘤细胞SOSP-9607的迁移及侵袭能力,肿瘤相关中性粒细胞可以通过分泌以IL-6为代表的多种细胞因子促进骨肉瘤的转移及侵袭。