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目的通过以Egr2/Egr3为核心的炎性通路阐述RA寒证的生物学特征,并以温经通络法干预CIA寒证动物模型,进一步明确其参与RA寒证的生物学机制,丰富RA中医辨证的生物学内涵。临床研究方法:纳入2015年1月-2016年1月在北京中医药大学东方医院风湿病科住院和门诊RA患者40例,分别为活动期20例,其中寒证患者10例,热证患者10例;缓解期20例,其中寒证患者10例,热证患者10例;正常健康对照组10例。记录基线资料、检测临床常规实验室指标和肌肉骨骼超声等,ELISA法测定外周血血清中IL-17A、IFN-γ、TGF-β、IL-6、IgG的表达;取外周血并分选CD4+T细胞后以免疫细胞化学法测定Egr2/Egr3、SCOS1/SOCS3、STAT1/STAT3在CD4+T细胞中的形态学表达;RT-qPCR 测定 Egr2/Egr3、SCOS1/SOCS3、STAT1/STAT3 mRNA在CD4+T细胞中表达。结果:基线资料,健康对照组、RA寒证组（活动期、缓解期）、热证组（活动期、缓解期）在性别、年龄、病程、药物使用、X线分期、中医证候量化评分和健康状况评估问卷（HAQ）比较无显著差异（P＞0.05）,其中RA活动期的中医证候量化评分和HAQ显著高于缓解期（P＜0.05）;MSUS检测800个小关节,各组间腱鞘炎、骨侵蚀、骨赘形成发生率无显著差异（P＞0.05）,寒证组和热证组活动期的滑膜增生分级显著高于寒证组和热证组缓解期（P＜0.05）。常规实验室检测,白细胞计数、中性粒细胞百分比、红细胞数、血红蛋白含量、血小板计数、C-反应蛋白及肝肾功（ALT、AST、BUN、Cre）在正常组、寒证组及热证组间均没有显著差异（P＞0.05）。寒证组活动期ESR较其余各组均显著升高（P＜0.05）。血清炎性因子水平,除IFN-γ外热证组血清IL-17A、TGF-β、IL-6、IgG水平均显著高于寒证组（P＜0.05）;热证组活动期和缓解期血清细胞因子水平均显著高于寒证组活动期和缓解期（P＜0.05）。寒证组和热证组PBMC无显著差异（P＞0.05）,热证组CD4+T细胞显著高于正常组和寒证组（P＜0.05）。免疫细胞化学法显示寒证组Egr2/Egr3平均光密度高于热证组和正常组（P＜0.05）,其中Egr3平均光密度在寒证和热证间无差异（P＞0.05）.寒证组CD4+T细胞Egr2/Egr3 mRNA、SOCS1/SOCS3 mRNA相对表达量较正常组和热证组均显著升高（P＜0.05）;寒证组STAT1 mRNA相对表达量较热证组显著降低（P＜0.05）;分层分析发现,寒证组活动期和缓解期Egr2/Egr3 mRNA、SOCS1/SOCS3 mRNA相对表达量较其余各组均显著升高（P＜0.05）;且寒证组缓解期Egr3、SOCS1 mRNA相对表达量较热证组活动期和热证组缓解期均显著升高（P＜0.05）。实验研究实验一:20只SPF级雌性Wistar大鼠随机分为2组:一组复制胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型;一组在复制CIA模型的基础上应用动物实验箱,从初次免疫开始连续28d给予风寒湿刺激。期间评价两组大鼠关节炎指数（AI）、足肿胀排水体积、关节疼痛阈值、外周关节体表温度、血流变血液黏度及凝血因子等。结果:两组发病率均为100%（10/10）,CIA组成模率为75.00%（6/8）,CIA寒证组成模率为77.78%（7/9）。CIA寒证组左足排水体积14d与基线有差异,而CIA组21d与基线有差异（P＜0.05）。两组大鼠造模14d后双足踝部肤温均升高,21d以后均有不同程度降低,组内比较两组各时间点差异均有统计学意义（P＜0.05）。CIA寒证组在造模21d左足体表温度显著低于CIA组（P＜0.05）。两组后足关节的疼痛阈值在各个时间点没有显著差异（P＞0.05）;两组左足在造模21d后热板刺激反应时间缩短,疼痛阈值降低;在28d后疼痛阈值升高（P＜0.05）。CIA寒证组中剪切率（50/s、30/s）和低剪切率（1/s）下的血液黏度值显著升高（P＜0.05）。CIA寒证组凝血酶凝结时间显著降低（P＜0.05）,其余剪切率下血液黏度和凝血因子在两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。实验二:SPF级雌性Wistar大鼠110只,除正常组外建立RA寒证动物模型,造模后分为模型组、雷公藤多苷组、甲氨蝶呤组、芍甘附子汤（SGFD）大剂量组、SGFD中剂量组、SGFD小剂量组,并以蒸馏水、雷公藤多苷、甲氨蝶呤、SGFD大中小剂量进行灌胃干预,每日1次,持续4周。给药期间评估各组大鼠一般情况、足趾肿胀体积、关节炎指数（AI）、脏器指数等。取材后免疫组织化学法测定Egr2/Egr3、SCOS1/SOCS3、STAT1/STAT3、IL-17A、IFN-γ、TGF-β、IL-6 在滑膜中的形态学表达;RT-qPCR 测定 Egr2/Egr3、SCOS1/SOCS3、STAT1/STAT3、IL-17A、IFN-γ mRNA在滑膜中的表达;ELISA法测定外周血血清中IL-17A、IFN-γ、TGF-β、IL-6 的表达。结果:一般状况,给药基线各给药组体重、双足排水体积、AI评分均无显著差异（P＞0.05）,给药期间体重逐渐增加,双足排水体积和AI评分降低,但各给药组间无显著差异（P＞0.05）。给药4周后,模型组和各给药组脾脏指数较正常组显著升高（P＜0.05）,芍甘附子汤大剂量组和中剂量组的胸腺指数较模型组显著降低（P＜0.05）;芍甘附子汤大剂量组和中剂量组的心脏指数较正常组升高（P＜0.05）,中剂量组较模型组升高（P＜0.05）。组织病理学显示,模型组和各造模组均有不同程度滑膜增生、炎性细胞浸润、骨侵蚀等,各给药组较模型组有不同程度减轻。大鼠踝关节免疫组化显示,各治疗组Egr2/Egr3平均光密度模型组升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）。模型组大鼠外周血IL-6、TGF-β、IFN-γ、IL-17A水平较正常组和各给药组均显著升高（P＜0.05）;各治疗组TGF-β、IFN-γ水平较正常组升高（P＜0.05）,较模型组降低（P＜0.05）;芍甘附子汤大剂量组IL-17A水平较MTX组、雷公藤多苷组、中剂量和小剂量组均显著降低（P＜0.05）。模型组和各给药组Egr2/Egr3 mRNA的相对表达量较正常组升高,其中芍甘附子汤中剂量组Egr2/Egr3 mRNA的相对表达量均较正常组显著升高（P＜0.05）;MTX组、雷公藤多苷组、芍甘附子汤中剂量组SOCS1 mRNA相对表达量较正常组显著升高（P＜0.05）,模型组、雷公藤多苷组、芍甘附子汤大剂量组、中剂量组SOCS3 mRNA相对表达量较正常组显著升高（P＜0.05）。芍甘附子汤小剂量组STAT1 mRNA相对表达量较其余各组均显著升高（P＜0.05）;芍甘附子汤小剂量组STAT3 mRNA相对表达量较正常组、模型组及MTX组显著升高（P＜0.05）;模型组和各治疗组IFN-γmRNA相对表达量较正常组升高,其中模型组较正常组显著升高（P＜0.05）;芍甘附子汤大剂量组和小剂量组IL-17A mRNA相对表达量较MTX组显著降低（P＜0.05）。实验三:大鼠外周血分选CD4+T细胞后测定Egr2/Egr3、SCOS1/SOCS3、STAT1/STAT3 mRNA在CD4+T细胞中表达。流式细胞仪测定CD4+T细胞经T细胞（抗原）受体（T cell receptor,TCR）刺激后,CD4+IL-17A+T 细胞以及 CD4+IFN-γ+T细胞的变化。结果:MTX组Egr2 mRNA相对表达量较模型组和其余治疗组显著升高（P＜0.05）;各组Egr3 mRNA相对表达量无显著差异（P＞0.05）;芍甘附子汤大剂量组SOCS1/SOCS3 mRNA相对表达量较正常组降低（P＜0.05）。STAT1 mRNA相对表达量在MTX组显著升高（P＜0.05）,而其STAT3 mRNA相对表达量与正常组、模型组及其余治疗组无显著差异（P＞0.05）。大鼠外周血CD4+IFN-γ+T细胞（Th1细胞）百分比在各组间差异无统计学意义（P＞0.05）;而雷公藤组CD4+IL-17A+T细胞（Th17细胞）百分比较MTX组显著升高（P＜0.05）,其余各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论1、RA寒证有其生物学特征RA寒证可高表达Egr2/Egr3,并通过上调SOCS1/SOCS3水平,抑制STAT1/STAT3的表达,进而降低血清炎性细胞因子的水平,缓和临床症状表现;尽管MSUS下滑膜增生分级低于RA热证,但滑膜增生仍持续不减。2、温经通络法对RA寒证Egr2/Egr3相关指标的影响芍甘附子汤为代表的温经通络法干预后,RA寒证大鼠模型滑膜组织Egr2/Egr3、SOCS1/SOCS3的表达上调,且大鼠外周血细胞因子水平降低,其中以中剂量最突出,与临床研究结果相互呼应。