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背景与目的:肺动脉高压（Pulmonary arterial hypertension,PAH）,它指的是肺动脉压力的增高,导致肺小动脉的收缩,血管重塑和伴有血栓形成的为特征的临床一系列疾病的统称,包括了病理生理和血流动力学的改变[1]。PAH的血流动力学诊断标准[2]:在静息的状态下,右心导管检测到的肺动脉平均压（mPAP）≥25mmHg,并且肺小动脉楔压（PAWP）≤15mmHg以及同时满足肺血管阻力>3Wood单位[3,4]。中国于2018年更新了2007年版肺动脉高压诊治的专家共识,发布了《中国肺高血压诊治指南》,并为我国广大的肺高压患者提供了新的诊断与治疗的依据。国内外专家通过各自的努力在肺动脉高压的筛查方式、基因诊断和靶向药物治疗方面均取得了瞩目的进步,但流调显示肺高压的自然生存率只有2.8[5]年,即使给予安立生坦（内皮素受体拮抗剂）、西地那非（磷酸二酯酶抑制剂-5）等靶向药物患者的寿命也只能存活3.6[6]年,而特发性（Idiopathic pulmonary arterial hypertension,IPAH）及遗传性肺动脉高压在经过常规治疗后,5年生存率只有20.8%[7]。近年来,大量研究结果显示多种microRNAs（miRNAs）参与了各种心血管疾病[8],包括肺动脉高压[9]的发生发展过程,这使得miRNAs逐渐成为研究的热点。本课题组利用生物信息学软件预测出参与肺动脉高压的6种可能的miRNAs,并检测其在肺动脉高压患者和对照组人群血浆中的表达,寻找在肺动脉高压患者血浆中miRNAs和I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶1（A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like motifs 1,ADAMTS1）之间的关系,进一步明确两者是否存在靶向调节。并且通过一系列的实验了解miRNA-142-5p对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞（Pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC）增殖作用的影响,为诊断PAH提出可能的一种生物标志物,为PAH的治疗提供新的理论依据。方法:大量的动物实验与科学研究表明ADAMTS1与肺动脉高压的发生发展有着密切的关系。利用应用生物信息学软件（miRNA.org,TargetScan等）预测靶向调控ADAMTS1的miRNAs。应用酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测16例空白对照组人群和60例肺动脉高压患者血浆中ADAMTS1的含量。用实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,qRT-PCR）技术检测16例空白对照组人群和60例肺动脉高压患者血浆中6个预测目标miRNAs的表达情况,并确定是否具有相关性,筛选出miR-142-5p作为我们的研究对象。而后我们选择建立野百合碱诱导的肺高压大鼠模型,培养原代肺动脉血管平滑肌细胞（PASMCs）、传代并保存。利用Lipofectine2000分别将miR-142-5p mimic和miR-142-5p inhibitor转染入PASMCs细胞,qRT-PCR实验检测miR-142-5p的表达水平。CCK-8实验检测miR-142-5p对PASMCs的增殖的影响。细胞流式实验（flow cytometry,FCM）检测miR-142-5p对PASMCs细胞周期的影响。应用生物信息学软件预测到miR-142-5p的靶基因为ADAMTS1。利用分子克隆技术,构建pmirGLO-ADAMTS1 3’-UTR载体及突变体。培养HEK29细胞,将miR-142-5p和pmirGLO-ADAMTS1 3’-UTR或突变体共转染入细胞中,双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组荧光强度的变化,并阐明两者之间是否存在靶向调节的关系。培养PASMCs,应用同样的Lipofectine2000将miR-142-5p mimic及miR-142-5p inhibitor转入PASMCs中,qRT-PCR实验和Western blot实验分别检测ADAMTS1mRNA和蛋白水平的变化。利用本室构建成功的pcDNA3.1-ADAMTS1表达质粒,将pcDNA3.1-ADAMTS1和miR-142-5p mimic共转染入PASMCs中,使用Western blot实验检测ADAMTS1的表达。同样用CCK-8实验检测共转染ADAMTS1和miR-142-5p后对PASMCs的增殖的影响,细胞流式实验（Flow cytometry,FCM）检测共转染ADAMTS1和miR-142-5p对PASMCs细胞周期的影响。结果:ELISA结果显示,ADAMTS1在肺动脉高压组人群中表达显著低于对照组人群。qRT-PCR结果显示:miR-181b-5p、let-7e-5p在血浆中表达量太低;miRNA-181a-5p、miRNA-181c-5p血浆表达量与正常人群中没有统计学差异;miR-142-5p、let-7b-5p在肺动脉高压人群血浆表达量明显升高,存在统计学差异,两者相比,miR-142-5p表达量高且统计学差异明显。miRNA-142-5p在肺动脉高压患者血浆中的表达与对照组患者相比升高了127%。在PASMCs中成功过表达miR-142-5p后,CCK-8结果显示,miR-142-5p促进了PASMCs的增殖。FCM结果显示,过表达miR-142-5p使得PASMCs的G0/G1期细胞百分比从66.93%降低到58.64%,而S期细胞百分比从22.01%升高至38.64%。已有多项研究表明ADAMTS1与肺动脉高压密切相关。应用生物信息学软件也预测出可能参与到肺动脉高压发生发展过程中的miR-142-5p的靶基因之一为ADAMTS1。双荧光素酶报告基因实验结果显示ADAMTS1 3’-UTR区域的荧光素酶活性可以被miR-142-5p所降低。在PASMCs中过表达miR-142-5p时,ADAMTS1基因mRNA水平降低47%,蛋白表达水平降低了31%。在PASMCs中共转染miR-142-5p mimic与pcDNA3.1-ADAMTS1质粒后,ADAMTS1蛋白表达水平升高了152%。CCK-8实验结果显示共转染ADAMTS1和miR-142-5p后可以抑制PASMCs的增殖。FCM实验结果显示,与对照组相比较,共转染ADAMTS1和miR-142-5p后PASMCs的G0/G1期细胞百分比61.18%上升到73.04%,而S期则由34.67%下降到21.13%。结论:本实验研究结果表明,miR-142-5p在肺动脉高压患者血浆中表达显著升高,而ADAMTS1在肺动脉高压患者血浆中表达明显降低。在PASMCs中过表达miR-142-5p后,miR-142-5p通过靶基因ADAMTS1表达下调从而促进PASMCs的增殖及周期转换过程。上述结果表明在肺动脉高压的疾病发生发展中,miR-142-5p可以通过下调ADAMTS1的表达水平参与PASMCs的增殖过程。miR-142-5p含量的高低可能为临床诊断PAH提供新的检测目标,而对其下游靶标的调节可以为治疗肺动脉高压提供新的理论依据。