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[目的](1)利用基因高通量Miseq测序技术对比分析结直肠癌组织与癌旁正常肠粘膜组织中miRNA的差异表达。(2)应用实时荧光定量PCR(Quantitative Real time PCR RT-qPCR)技术验证 miRNA452-5p 和 miRNA215-5p 在结直肠癌组织与癌旁正常肠粘膜组织中表达,并通过分析其与临床病理资料之间的关系,为进一步研究miRNA 452-5p和miRNA215-5p在结直肠癌中生物学功能及其调控下游靶基因机制奠定基础。(3)绘制 ROC 曲线(Receiver operating characteristic,ROC)和曲线下面积(Area under the ROC curve,AUC)评估 miRNA452-5p、miRNA215-5p及2-miRNA panel的诊断价值,期望探索出潜在的结直肠癌诊断价值的分子标志物和治疗靶点。[方法](1)收集3例结直肠癌组织及配对癌旁正常肠粘膜组织送至上海康成生物有限公司进行基因高通量Miseq测序筛选差异表达miRNA。(2)收集2017年7月至2017年10月在昆明医科大学第一附属医院消化内镜中心行肠镜检查病理诊断为结直肠癌的患者标本30组。患者签署知情同意书,并确定患者未做过放化疗及免疫治疗。收集患者年龄、性别、肿瘤位置、分化程度、浸润范围、Ducks分期、组织类型等临床病理资料。实验分组为结直肠癌组织、癌旁正常肠粘膜组织。(3)采用RT-qPCR技术检测全部患者结直肠癌组织及癌旁正常肠粘膜组织中miRNA452-5p、miRNA215-5p的表达,并分析其与临床病理资料之间的关系。(4)绘制ROC曲线和曲线下面积AUC评估miRNA452-5p、miRNA215-5p及2-miRNA panel的诊断价值。[结果](1)基因高通量Miseq测序结果显示:结直肠癌组织与癌旁正常肠粘膜组织差异表达miRNA中40种miRNA表达上调,48种miRNA的表达下调。采用Mirdbv5和Targetscan7.1两种靶基因预测软件测出上调miRNA靶基因共412个,下调miRNA靶基因372个。GO分析的结果显示:在这些变化的miRNA中,显著调控的GO过程包括:生物合成、细胞代谢、主动的细胞内加工、细胞周期调控、细胞内信号转导、细胞内的转运等过程。KEGG通路结果显示:在结直肠癌组织中,显著调控的KEGG通路主要涉及代谢、遗传信息处理、环境信息处理和细胞过程等通路。(2)应用实时荧光定量PCR验证结果显示:①miRNA452-5p在结直肠癌组织中表达量是205.19±123.27,在正常的肠粘膜组织中表达量是576.32±182.4,miRNA452-5p在结肠癌组织中表达显著下调,且差异有统计学意义(t=6.078,p<0.001);②miRNA215-5p在结直肠癌组织中表达量是3.46±1.27,在正常的肠粘膜组织中表达量是2.07±1.22,miRNA215-5p在结肠癌组织中表达显著上调,且差异有统计学意义(t=-2.836,p<0.001)。(3)miRNA452-5p表达与结直肠癌患者临床病理特征间关系:①miRNA452-5p的表达与年龄不相关,>60岁组相对表达量为236.68(95.32,372.06),<60岁组相对表达量为222.63(116.07,498.36),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.525,P=0.601)。②miRNA452-5p的表达与性别不相关,男性组相对表达量为251.27(105.06,436.77),女性组相对表达量为210.24(104.24,459.65),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.426,P=0.634)。③miRNA452-5p的表达与分化程度不相关,低中分化组相对表达量为234.43(124.53,459.65),高分化组相对表达量210.84(88.90,406.53),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.283,P=0.777)。④miRNA452-5p的表达与肿瘤位置不相关,直肠组相对表达量为124.53(85.38,251.27),结肠组相对表达量为276.79(186.84,488.81),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-1.747,P=0.081)。⑤miRNA452-5p的表达与浸润深度不相关,T2组相对表达量为114.38(90.25,413.93),T3+T4组相对表达量为242.85(166.40,453.24),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-1.091,P=0.275)。⑥miRNA452-5p的表达与淋巴转移不相关,无淋巴转移组相对表达量为138.06(90.25,413.93),淋巴转移组相对表达量为242.85(213.65,453.24),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.945,P=0.345)。⑦miRNA452-5p的表达与Dukes分期不相关,A+B组相对表达量为186.84(99.57,462.17),C+D组相对表达量为251.27(139.95,470.04),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.367,P=0.713)。⑧miRNA452-5p的表达与组织分型不相关,收集结直肠癌组织病理分型均为腺癌,且未进行具体分化。miRNA215-5p表达与结直肠癌患者临床病理特征间关系:①miRNA215-5p的表达与年龄不相关,>60岁组相对表达量为3.95(2.76,5.54),<60岁组相对表达量为3.22(2.65,7.11),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.053,P=0.958)。②miRNA215-5p的表达与性别不相关,男性组相对表达量为4.07(2.79,5.45),女性组相对表达量为3.05(2.70,0.18),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.370,P=0.711)。③miRNA215-5p的表达与分化程度不相关,低中分化组相对表达量为4.25(2.74,8.64),高分化组相对表达量3.58(2.68,5.06),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.542,P=0.588)。④miRNA215-5p的表达与肿瘤位置不相关,直肠组相对表达量为2.65(1.86,4.22),结肠组相对表达量为4.07(2.79,7.11),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-1.756,P=0.079)。⑤miRNA215-5p的表达与浸润深度不相关,T2组相对表达量为3.13(2.68,5.58),T3+T4组相对表达量为4.47(2.53,6.74),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-1.091,P=0.275)。⑥miRNA215-5p的表达与淋巴转移不相关,无淋巴转移组相对表达量为3.13(2.78,5.11),淋巴转移组相对表达量为4.41(2.53,6.74),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.105,P=0.916)。⑦miRNA215-5p 的表达与 Dukes 分期不相关,A+B 组相对表达量为3.13(2.75,5.11),C+D组相对表达量为5.25(3.21,6.74),两组间相比较,差异无统计学意义(Z=-0.849,P=0.396)。⑧miRNA215-5p的表达与组织分型不相关,收集结直肠癌组织病理分型均为腺癌,且未进行具体分化。(4)绘制ROC曲线和曲线下面积AUC结果显示:miRNA452-5p曲线下面积AUC =0.859(P<0.001,95%CI = 0.719-0.999),miRNA215-5p 曲线下面积为 AUC =0.879(P<0.001,95%CI = 0.757-1.0)。采用二元 logistic 回归分析方法将miRNA452-5p、miRNA215-5p 引入回归方程,构建 2-miRNAs panel,2-miRNAs panel 曲线下面积为 AUC = 0.930(P<0.001,95%CI = 0.833-1.0)。[结论](1)miRNA452-5p在结肠直癌组织中表达显著下调,miRNA215-5p在结直肠癌组织中表达显著上调,miRNA452-5p及miRNA215-5p在结直肠癌中表达与患者年龄、性别、分化程度、肿瘤位置、浸润深度、淋巴转移、Dukes分期、组织分型等均不相关,且两者对结直肠癌诊断价值中等。(2)构建2-miRNAs panel,其对结直肠癌诊断价值较高,可作为潜在的结直肠癌诊断价值的分子标志物。