【摘 要】
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肿瘤转移过程是多基因多因素综合作用的结果,在肿瘤细胞转移过程中,癌细胞首先从肿瘤组织中脱离下来,这一过程与由肌动蛋白和肌球蛋白纤维所产生的收缩运动是分不开的.肌球蛋
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肿瘤转移过程是多基因多因素综合作用的结果,在肿瘤细胞转移过程中,癌细胞首先从肿瘤组织中脱离下来,这一过程与由肌动蛋白和肌球蛋白纤维所产生的收缩运动是分不开的.肌球蛋白轻链激酶(Myosin Light Chain Kinase,MLCK)是调节平滑肌细胞的收缩及非肌肉细胞的细胞形态、细胞周期和细胞运动的关键酶,主要作用是激活无活性的肌球蛋白调节轻链,使其发生磷酸化,导致平滑肌细胞收缩和非肌肉细胞运动,MLCK的激酶催化区主要参与肌球蛋白轻链磷酸化.该研究旨在探讨MLCK反义核酸和抑制剂对肺癌细胞转移表型的影响,进而揭示MLCK与肿瘤转移的关系.该实验中将含有1.4kbMLCK激酶区反义片段的逆转录病毒载体感染具有高转移倾向的肺癌PG细胞,以感染了空载体的PG细胞作为对照,用Western Blot方法检测MLCK表达水平的变化,证实MLCK的表达是否受到了抑制.此外,将MLCK的特异性抑制剂ML-7作用于PG细胞,测定其细胞生长曲线,并通过Scrape Motility实验检测细胞的移动能力,应用尿素胶电泳检测肌球蛋白调节轻链的磷酸化水平的变化.建立了PG细胞SCID小鼠肿瘤转移模型,以高转移倾向肺癌细胞为研究对象,将ML-7处理的PG细胞以及导入了MLCK反义核酸和空载体的PG细胞分别接种SCID小鼠,进而探讨MLCK对高转移倾向肺癌细胞转移表型的影响.研究结果显示,感染了MLCK激酶区反义核酸的PG细胞,MLCK的表达受到了明显的抑制.15μM的MLCK特异性抑制剂ML-7处理PG细胞3小时,可使PG细胞的生长受到抑制,移动能力明显降低,并使肌球蛋白调节轻链磷酸化的水平降低.动物实验结果显示,未处理的PG细胞接种SCID小鼠后,肿瘤潜伏期约为10天,肺转移为5/5例,脾转移为4/5例,肾转移为3/5例,淋巴结转移为2/5例,骨转移为3/5例.对照组的空载体组的实验结果与上述结果相似.实验组MLCK激酶区反义核酸感染PG细胞后,接种SCID小鼠,肿瘤潜伏期为12天,仅出现脾转移为2/5例.ML-7处理的PG细胞接种SCID小鼠,肿瘤潜伏期为15天,出现脾转移为2/5例,淋巴结转移为1/5例.综上所述,当MLCK表达下调时,高转移倾向的肺癌细胞株转移能力明显下降.MLCK特异性抑制剂ML-7可抑制细胞的生长、降低细胞的移动能力,并使肌球蛋白调节轻链磷酸化水平下降,从而抑制了肿瘤细胞的转移.上述结果进一步表明,MLCK与肿瘤细胞转移具有密切的关系.
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