【摘 要】
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目的:本研究采用体外实验模型的方法,探讨山豆根2-（2’,4’-二巯基苯基）-5,6-亚甲基二氧基苯并呋喃化合物（ABF）对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖、克隆、迁移、侵袭、周期、凋亡的作用以及对PI3K/Akt/m-TOR信号通路的干预作用。阐明ABF抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖并促进凋亡作用的分子机制。方法:1.采用MTT实验方法,分析ABF对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2
【基金项目】
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国家自然基金（编号:81473309、81460582）； 广西科技厅项目（编号:AA18242024）； 广西中医药大学2019年研究生教育创新计划项目（编号:Xjzd022）；
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目的:本研究采用体外实验模型的方法,探讨山豆根2-（2’,4’-二巯基苯基）-5,6-亚甲基二氧基苯并呋喃化合物（ABF）对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖、克隆、迁移、侵袭、周期、凋亡的作用以及对PI3K/Akt/m-TOR信号通路的干预作用。阐明ABF抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖并促进凋亡作用的分子机制。方法:1.采用MTT实验方法,分析ABF对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖作用的影响。2.采用单细胞克隆形成实验方法,分析ABF对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2克隆形成能力的影响。3.采用划痕实验方法,分析ABF对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2迁移能力的影响。4.采用Transwell侵袭小室实验方法,分析ABF对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2侵袭能力的影响。5.采用流式细胞实验方法,分析ABF对鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2细胞周期、凋亡的影响。6.采用Western blot实验方法,检测鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2中增殖、凋亡以及PI3K/Akt/m-TOR信号通路蛋白表达情况。7.采用实时荧光定量PCR实验方法,检测ABF对PI3K/Akt/m-TOR信号通路相关基因m RNA表达的影响。结果:1.MTT实验发现ABF能显著抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖,且成剂量和时间依赖性。2.单细胞克隆形成实验发现ABF能显著抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖,克隆形成率降低至3.5%,4.0%。3.划痕实验发现ABF能显著抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2迁移能力,愈合率降低至35.99%,38.05%。4.Transwell侵袭小室实验发现ABF能显著抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2侵袭能力,穿过小室的比率降低至17.04%,14.06%。5.流式细胞术实验发现ABF能促进鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2凋亡,3.5μg/ml浓度给药48 h后CNE-1和CNE-2的凋亡率分别为57.44%和64.17%。同时发现细胞被阻滞在S和G2/M期。6.Western blot检测发现ABF可下调鼻咽癌细胞的Bcl-2/Bax的比值和Vimentin、Snail、PI3K、Akt、m TOK的表达;上调β-catenin、Cleaved PARP、Caspase 3、Caspase 7、Caspase 8、Cleaved caspase 9的表达。7.实时荧光定量PCR检测发现ABF能显著下调CNE-1、CNE-2细胞中PI3K、Akt、m TOR、P70S6K的m RNA表达。结论:1.ABF能显著抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2增殖和克隆,且成剂量和时间依赖性。2.ABF能显著抑制鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2侵袭及转移,其机制可能与抑制鼻咽癌细胞EMT的发生有关。3.ABF可诱导鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2凋亡,其机制可能与调节Caspase家族、Bcl-2家族以及PI3K/Akt/m-TOR信号通路有关。
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