猪瘟(Classical swine fever)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的高度传染性的病毒性疾病，该病以高热稽留、出血梗死、高死亡率为特征，在世界范围内给养猪业造成严重的经济损失。其病原猪瘟病毒基因组全长约12.3kb，为具有囊膜的单股正链RNA病毒，是黄病毒科瘟病毒属的重要成员之一。中国从二十世纪五十年代开始大规模推广猪瘟兔化弱毒疫苗，猪瘟疫情得到很好地控制，但部分地区仍时有爆发。在中国猪瘟病毒有多个亚型，其中2.1亚型是中国主要的流行毒株，2.1b和2.1c亚型曾相继出现。最近有报道新亚型2.1d毒株在免疫过猪瘟兔化弱毒疫苗的猪场流行，预示着新的猪瘟疫情很有可能会再次爆发。　　本研究从47份疑似猪瘟病料中分离出一株猪瘟病毒，根据Genbank上发表的猪瘟病毒(CSFV)全基因组序列，选择猪瘟强毒株和兔化弱毒疫苗株序列存在的差异区域，分别设计了针对猪瘟强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物，建立了一种能区别CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-nPCR检测方法，并鉴定分离的毒株为野毒株，命名为ZJX-15。对其进行外源病毒检测，未发现该毒株混有PRRSV、PCV、PRV、PPV、PEDV等病原。该毒株连续传代至F15代，TCID50可达10-542/0.1ml。　　根据NCBI上登录的猪瘟病毒全基因组序列，设计10对引物扩增CSFV ZJX-15株全长序列。序列分析显示该毒株全长12295bp，5端非编码区长372bp，3端非编码区长226bp，中间的ORF全长11697bp，编码3899个氨基酸。通过对E2全长序列构建进化树结果显示，该毒株属于新型2.1d亚型，与同型毒株JSZL全长序列进行同源性比较发现两者核苷酸一致性为97.9％，氨基酸为98.7％。与CSFV其他亚型相比，该2.1d亚型流行毒株在E2蛋白上具有相同的位点突变特征，即K31R、N34S、L182、R205K、R303K和V331A。E0蛋白序列分析显示，其功能性区域如RNase活性区域、半胱氨酸位点等均保守。对猪瘟病毒所报道的9个细胞表位进行比对，ZJX-15有4个表位发生突变，其中2个位于E2蛋白，其余2个位于E0和NS2-3蛋白。　　E0蛋白是猪瘟病毒唯一可以分泌到感染细胞上清的囊膜蛋白，在机体内可诱导产生中和抗体，使机体产生对CSFV的免疫力。以原核表达系统体外表达了C SFV ZJX-15毒株E0全长蛋白，以此为抗原免疫Balb/c小鼠制备抗E0的单克隆抗体。细胞融合后经有限稀释法筛选，结合ELISA（酶联免疫吸附试验）、IFA（间接免疫荧光试验），筛选到3株稳定分泌抗E0蛋白的单克隆抗体细胞株。获得的三株单抗均可以与重组蛋白His-E0、CSFV感染细胞后病毒E0蛋白发生反应。亚型鉴定3株单抗均为IgG2a亚型。E0单抗的获得，为研究其在CSFV生命周期中所发挥的作用提供了有力工具。　　作为CSFV的主要保护性抗原蛋白之一，E2是CSFV最重要的囊膜蛋白。该蛋白位于病毒囊膜表面，参与病毒感染宿主的过程。其抗原决定簇大部分位于N端氨基酸残基690～866位之间，本研究以原核表达系统体外表达CSFV ZJX-15株E2蛋白序列中755～844位氨基酸，以此为抗原免疫Balb/c小鼠制备抗E2蛋白单克隆抗体。细胞融合后经有限稀释法筛选，结合ELISA（酶联免疫吸附试验）、IFA（间接免疫荧光试验），筛选到4株稳定分泌抗E2蛋白的单克隆抗体细胞株。这些单抗均可以与E2蛋白截短体His-△E2、主要抗原区His-E2-570、感染细胞的病毒蛋白发生反应。亚型鉴定4株单抗均为IgG1亚型。E2单抗的获得为CSFV相关血清学检测方法的建立及E2蛋白功能的研究提供了有力工具。