本文探讨了生物组织质谱成像方法中几个关键技术:a.组织的保存、切片的转移方式;b.基质和被分析物共结晶大小和均匀度的控制。C.质谱成像图分辨率的影响因素。阐述了这几个关键技术对实验结果的影响和我们解决问题的方法。设计了新型靶盘装置解决组织切片转移的难点。设计了新型基质喷雾装置,解决共结晶大小和均匀度控制问题。自编了数据分析软件,软件具备“组织切片质谱平均谱”和“谱峰命中次数Hits值分布统计”两个重要功能。实验结果表明,Hits值能体现组分在切片上的分布情况。Hits值越大,组分分布越广。探讨了质谱成像技术的评价方法和指标,重点对重复性和稳定性进行了分析。提出采用三种方法考察重复性,并对各方法给出了评价指标。提出稳定性考察应包括两个方面。实验结果显示新鲜组织在-80℃冰箱中贮存18个月内组织中多肽或蛋白组分没有发生明显的变化。而组织覆盖基质后于-20℃保存超过2天质谱信号就明显下降。这说明组织切片覆盖基质后不可以长久保存,应尽快分析检测。采用HPM辐射大鼠,复制了HPM辐射损伤模型。运用质谱成像技术研究了正常与模型组大鼠海马蛋白组的差异。获得了正常和模型组大鼠海马组织一些组分的质谱成像图。对照组每张切片获得5902张质谱图,320张组分质谱成像图;模型组获得5993张质谱图,346张质谱成像图。采用自编软件和商用软件,对两组质谱数据和图像数据进行了差异统计分析,获得两者差异组分共有199个。对其中的部分差异组分进行了鉴定,共鉴定出差异蛋白18个。鉴定结果说明微波辐射致海马损伤是一个多种蛋白参与的复杂过程。这些差异分子的发现对于明确微波辐射致伤效应和致伤机理的研究具有重要意义。尝试探讨了切片原位加蛋白酶液抗原修复后直接质谱扫描分析福尔马林固定组织多肽谱的方法。通过正交设计实验,优化实验条件,我们建立了在福尔马林固定组织切片上加胰蛋白酶液(0.1ug/ul),60℃超声10分钟进行修复提取,再直接质谱扫描分析的新方法。实验结果表明,质谱出峰数明显增加,质谱信号明显增强。说明我们建立的新方法适用于福尔马林固定组织的多肽谱分析。