【摘 要】
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研究目的:近年来,随着介入诊疗技术的发展和应用的增多,经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention,PCI）作为其中最具代表性的介入治疗方式,可有效改善急性冠脉综合征患者临床症状和预后。支架作为一种外源性物质,通过促进血管平滑肌细胞的增殖、迁移、免疫反应和植入后新生内膜的形成,导致支架后再狭窄（in stent restenosis,ISR）。炎症机制
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研究目的:近年来,随着介入诊疗技术的发展和应用的增多,经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention,PCI）作为其中最具代表性的介入治疗方式,可有效改善急性冠脉综合征患者临床症状和预后。支架作为一种外源性物质,通过促进血管平滑肌细胞的增殖、迁移、免疫反应和植入后新生内膜的形成,导致支架后再狭窄（in stent restenosis,ISR）。炎症机制是导致支架内再狭窄形成的主要核心机制之一,Toll样受体4/核因子-κB（TLR4/NF-κB）信号转导通路可能参与其中,在内膜增生及再狭窄的过程中发挥着不可或缺的作用。结合近些年来现代医学的研究进展,我们发现中医“毒瘀互结”的病因病机与血管再狭窄的核心机制之一“炎症学说”有着密切的联系。本实验拟从细胞水平层面,通过建立体外支架内再狭窄炎症细胞模型,模拟解毒活血方在介导TLR4/NF-κB信号转导通路方面对PCI术后患者抑制炎症反应和血管平滑肌细胞增殖的作用,为相关临床治疗的顺利开展提供理论基础。研究方法:本实验利用TNF-α（肿瘤坏死因子-α）诱导A7r5细胞（大鼠胸主动脉平滑肌细胞）发生炎症反应,模拟体外支架内再狭窄炎症细胞,以阿司匹林含药血清、TLR4抑制剂和NF-κB抑制剂为对照组,从细胞水平层面上初步探讨解毒活血方通过TLR4/NF-κB通路干预炎症进而抑制平滑肌细胞增殖的作用机制。本实验先制备含药血清,再确定解毒活血方含药血清的毒性及最佳抑制浓度,最后观察解毒活血方含药血清对A7r5细胞增殖活性、炎症因子TNF-α、IL-1β水平的抑制作用,用western blot法测定TLR4、NF-κB及My D88蛋白表达量。研究结果:1.TNF-α诱导组细胞增殖活性相较于空白组显著升高（P＜0.05）。阿司匹林血清组、解毒活血方血清组与TNF-α诱导组相比,两组都可使A7r5细胞增殖活性降低（P＜0.05）。2.与空白组相比,炎症因子TNF-α和IL-1β含量在TNF-α诱导组、解毒活血方血清组、阿司匹林血清组、TLR4抑制剂组和NF-κB抑制剂组显著升高（P＜0.05）。同TNF-α诱导组比较,解毒活血方血清组、阿司匹林血清组、TLR4抑制剂组和NF-κB抑制剂组TNF-α和IL-1β含量显著降低（P＜0.05）。与解毒活血方血清组相比,阿司匹林血清组TNF-α和IL-1β含量显著降低（P＜0.05）。3.TNF-α诱导组相较于空白组TLR4、NF-κB、My D88蛋白表达上调,解毒活血方含药血清及阿司匹林含药血清都可使TLR4、NF-κB、My D88蛋白表达下调。研究结论:1.TNF-α能诱导A7r5细胞模拟体外支架内再狭窄炎症细胞,为研究PCI术后再狭窄提供理论基础。2.TNF-α能使A7r5细胞的增殖活性增强,解毒活血方可抑制A7r5细胞的增殖活性。3.TNF-α能诱导A7r5细胞产生炎症反应,解毒活血方具有抗炎作用,效果稍弱于阿司匹林片。4.解毒活血方可下调细胞TLR4、NF-κB、My D88蛋白表达量,抑制平滑肌细胞的增殖及迁移。
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