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背景: 膀胱过度活动症(overactive bladder,OAB)是一组以尿急为主要特征,常伴有尿频、夜尿增多,可伴有或不伴有急迫性尿失禁的症候群。其中,由于神经源性损害引起的神经源性膀膀胱尿道功能障碍伴有OAB,被称为神经源性OAB。逼尿肌反射亢进(detrusor overactivity,DO)是其主要的尿动力学表现。研究发现,脊髓损伤后,在膀胱的储尿期,副交感神经末梢及尿路上皮会持续释放大量的神经源性及非神经源性的乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach),作用于膀胱粘膜的毒蕈碱型受体(Muscarinic receptor,M receptor),使盆传入神经C纤维兴奋性增强,发生OAB和DO。临床研究发现,艾灸治疗尿急、尿频、急迫性尿失禁等下尿路疾病疗效确切,但艾灸是否通过调节盆传入神经系统从而发挥改善膀胱功能的机制尚不清楚。 目的: 以神经源性OAB大鼠为研究对象,探讨艾灸对M受体介导的盆传入神经系统的调节作用,阐明艾灸改善神经源性OAB症状的传入神经机制,为临床治疗神经源性OAB提供新的思路。 方法: 1.神经源性OAB模型的制备:采用T9~10脊髓完全横断的方法建立神经源性OAB大鼠模型。 2.动物分组:6-8周龄雌性SD大鼠48只,将实验大鼠分为三部分。实验一评价艾灸对膀胱功能和盆传入神经C纤维的影响,将大鼠随机分为假手术组、模型组、艾灸组和辣椒素组;实验二评价艾灸对毒蕈碱M受体的影响,将大鼠随机分为假手术组、模型组和艾灸组;实验三评价艾灸对 M2受体的特异性作用,在实验二分组的基础上,将大鼠随机分为模型+M2受体激动剂组、模型+溶媒剂组、模型+M2受体激动剂+艾灸组和模型+M2受体阻断剂组。 3.艾灸方法:艾灸组采用隔盐隔姜灸“神阙”穴的方法,每次灸3壮,每日1次,连续治疗7天。假手术组和模型组进行与艾灸组相同时间、相同程度的捉抓刺激。 4.尿动力参数和盆神经放电的检测:采用神经电生理技术,在测定膀胱内压的同时,同步观察大鼠排尿时盆神经放电情况。 5.受体机制评价:采用荧光素生物发光发法,检测各组大鼠膀胱黏膜Ach、腺嘌呤核苷三磷酸(Adenosine Triphosphate,ATP)、一氧化氮(Nitrogen Monoxide,NO)含量;采用Western blotting和qPCR的方法检测各组大鼠膀胱黏膜M2、M3和P2X3受体mRNA和蛋白的表达。 结果: 1.艾灸改善神经源性OAB大鼠尿动力参数:与假手术组相比,模型组排尿间期明显缩短(P<0.01),排尿阈值压明显降低(P<0.01);与模型组相比,艾灸组可延长神经源性OAB大鼠的排尿间期(P<0.01),提高排尿阈值压(P<0.01)。 2.艾灸抑制神经源性OAB大鼠盆传入神经C纤维兴奋性:与假手术组相比,模型组大鼠盆传入神经兴奋性显著增强(P<0.01);与模型组相比,艾灸组大鼠盆传入神经兴奋性显著减弱(P<0.01);与辣椒素组相比,艾灸组大鼠盆传入神经兴奋性未见明显差异(P>0.05)。 3.艾灸降低神经源性OAB大鼠膀胱黏膜Ach的含量:与假手术组相比,模型组大鼠膀胱黏膜 Ach的含量明显增多(P<0.01);与模型组相比,艾灸组大鼠膀胱黏膜Ach的含量明显减少(P<0.01)。 4.艾灸抑制神经源性OAB大鼠膀胱黏膜M2受体mRNA表达,但对M3受体 mRNA表达无显著影响:与假手术组相比,模型组大鼠膀胱黏膜M2受体 mRNA表达明显升高(P<0.01),而M3受体mRNA表达变化不明显(P>0.05);与模型组相比,艾灸组大鼠膀胱黏膜层M2受体mRNA表达减少(P<0.01),而M3受体mRNA表达变化不明显(P>0.05)。 5.艾灸抑制神经源性OAB大鼠膀胱黏膜M2受体蛋白表达,但对M3受体蛋白表达无明显影响:与假手术组相比,模型组大鼠膀胱黏膜M2受体蛋白表达明显升高(P<0.01),而M3受体蛋白表达变化不明显(P>0.05);与模型组相比,艾灸组大鼠膀胱黏膜M2受体蛋白表达明显减少(P<0.01),而艾灸组大鼠膀胱黏膜M3受体蛋白表达变化不明显(P>0.05)。 6.艾灸调节 M2受体下游递质的释放和P2X3受体的表达:与假手术组相比,模型组大鼠膀胱黏膜ATP含量明显增多(P<0.01),NO含量明显减少(P<0.01),膀胱黏膜P2X3受体mRNA和蛋白的表达明显增多(均P<0.01);与模型组相比,艾灸组大鼠膀胱黏膜ATP含量明显减少(P<0.01),NO含量明显增多(P<0.01),膀胱膀胱黏膜P2X3受体mRNA和蛋白的表达均明显明显减少(P<0.01,P<0.05)。 7.艾灸模拟了M2受体阻断剂对膀胱功能的改善作用,M2受体激动剂可抑制艾灸对膀胱功能的改善作用: 1)尿动力学参数:与模型组相比,艾灸组大鼠的排尿间隔时间显著延长(P<0.01),排尿阈值压明显提高(P<0.01);与艾灸组相比,模型+M2受体阻断剂组大鼠排尿间隔时间和排尿阈值压均无明显差异(P>0.05);而模型+溶媒剂组,模型+M2受体激动剂组和模型+M2受体激动剂+艾灸组排尿间期均明显缩短(均P<0.01),排尿阈值压均明显降低(均P<0.05)。 2)盆传入神经兴奋性:与模型组相比,艾灸组大鼠的盆传入神经放电明显减弱(P<0.01);与艾灸组相比,模型+M2受体阻断剂组无明显差异(P>0.05);而模型+溶媒剂组,模型+M2受体激动剂组和模型+M2受体激动剂+艾灸组大鼠盆传入神经放电均明显增强(P<0.01)。 结论: 艾灸可通过下调膀胱黏膜Ach的释放,减少膀胱黏膜M2受体的表达,使M2受体下游的ATP的释放及P2X3的表达下降,从而减弱盆传入神经C纤维的兴奋性,以减少膀胱充盈过程中逼尿肌的过度收缩,改善神经源性OAB症状。