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目的明确丹红注射液(Danhong Injection,DHI)对原代心肌细胞(myocardial cells,MCs)生长的影响,探讨DHI对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)MCs的保护作用,基于细胞凋亡、cAMP/PKA信号通路和NF-κB信号通路探究其保护H/RMCs的机制。方法收集和纯化新生SD乳鼠的MCs进行原代培养。将96孔板的MCs分为正常组,20%、10%、5%、2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%、0.04%DHI组,细胞接近融合状态后,加入相应浓度DHI培养24h,MTT检测细胞的活性。将96孔板的MCs分为正常组,模型组,20%、10%、5%、2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%DHI组,细胞接近融合状态后,加入相应浓度的DHI,同时进行H/R造模(除正常组),MTT检测细胞的活性。将12孔板的MCs分为正常组,模型组,维拉帕米组,20%、10%、5%DHI组,细胞长满孔底后,加入相应浓度的维拉帕米和DHI,同时进行H/R造模(除正常组),Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡情况。将细胞瓶中的MCs分为正常组,模型组,20%、10%、5%DHI组。细胞接近融合状态后,加入相应浓度的DHI,同时进行H/R造模(除正常组),ELISA法、Western Blotting法和荧光定量RT-PCR法分析DHI对H/R MCs的cAMP/PKA信号通路关键因子的蛋白和mRNA表达水平的影响;荧光定量RT-PCR法分析DHI对H/R MC s的NF-κB信号通路关键因子mRNA表达水平的影响。结果MTT检测结果显示,与正常组比较,DHI 20%、10%、5%、1.25%组的MCs活性显著增加(P<0.01),模型组的MCs活性显著下降(P<0.01)。与模型组比较,DHI 20%、10%、5%、2.5%组H/R的MCs活性显著增加(P<0.01,P<0.05)。AnnexinV/PI双标法检测结果表明,与正常组相比,模型组、DHI 10%、5%组H/R的MCs凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组相比,维拉帕米组和DHI 20%、10%、5%组H/R的MCs凋亡率显著降低(P<0.01,P<0.05)。ELISA、Western Blotting 和荧光定量 RT-PCR 检测结果显示,与正常组相比,模型组中AC、CREB的蛋白含量和AC、CREB、PKA的mRNA表达量显著降低(P<0.01,P<0.05),模型组中p38MAPK的蛋白含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,DHI各剂量组中AC、CREB、p38MAPK的蛋白含量均有不同程度的升高(P<0.01,P<0.05,P>0.05),DHI 20%组中AC mRNA表达量显著升高(P<0.05),DHI 20%和DHI 10%组的CREB、PKA mRNA表达量显著升高(P<0.01,P<0.05)。与正常组相比,模型组 NF-κB、TNFR-1、TRADD、RIP1、IkBα和 IL-1β的 mRNA 表达量均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,DHI 20%、10%、5%组中NF-κB、TNFR-1、TRADD、IkBα和IL-1β的mRNA表达量均有不同程度的降低,而RIP1的mRNA表达量与模型组无显著差异(P>0.05)。结论DHI可增加MCs的活性,保护H/R的MCs。DHI对H/R MCs的保护作用可能与以下途径相关:(1)降低H/R的MCs的凋亡率;(2)通过上调cAMP/PKA 信号通路关键因子 AC、CREB、PKA 的 mRNA 和 AC、CREB、p38MAPK蛋白的表达促进能量代谢,从而保护MCs;(3)通过抑制NF-κB信号通路中NF-κB、TNFR-1、TRADD、IkBα和IL-1β的mRNA的表达抑制炎症反应,从而保护MCs。