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花生(ArachishypogaeaL.)是一种重要的经济作物,在农业生产和人们的日常生活中发挥着重要的作用。但是,众所周知,花生在其生长、发育以及贮藏的过程中,极其容易受到病原微生物的侵害,不仅使我国的农业生产造成了极大的危害,同时也给人类的健康带来了安全隐患。2s蛋白是花生子叶当中的一类抗真菌蛋白,虽然2s蛋白发现的比较早,但是因为其分子质量比较小,所以研究的还是比较少。有报道指出,花生2s清蛋白五个组分均具有蛋白酶抑制剂活性,为了充分了解花生2s抗菌蛋白的作用,本论文在实验室前期研究的基础上,以花生种子(汕油523)为材料,对花生种子中的2s抗菌蛋白进行如下的研究:首先是种子萌发过程中2s蛋白的动员和分泌;其次是花生种子在受黄曲霉侵染的过程中,2s-1蛋白和2s-5b蛋白的动员和定位;最后是花生子叶2s-5b蛋白体外抗菌作用的研究。 萌发实验中,通过免疫组织化学,SDS-PAGE等方法的检测,发现2s-1蛋白和2s-5b蛋白在花生萌发的早期,存在和分布比较广泛。但是随着萌发时间的增加,2s-1蛋白和2s-5b蛋白的含量均有所下降,萌发6d,几乎全部动员完毕。免疫组织化学实验结果当中,萌发6d时还有微弱的棕红色颜色区域的产生和分布;但是萌发8d,棕红色的分布区域所剩无几,说明2s蛋白已经动员完毕。 在黄曲霉菌侵染花生子叶的过程中,通过免疫组织化学,免疫荧光染色,激光共聚焦等方法来探究一下在侵染过程中,花生子叶当中抗菌蛋白的一个大致分布和定位,同时也进一步了解一下花生子叶抗菌蛋白与菌丝侵染之间的一个关系。发现花生子叶抗菌蛋白在子叶细胞的各个部位都有分布。通过激光共聚焦观察发现,菌丝侵入花生子叶细胞是一个动态的变化,即接近细胞,正在侵入细胞和最终进入细胞三个过程。在此过程中,抗菌蛋白分布在菌丝的周围,推测其应该与抵抗菌丝的入侵有直接关系。 在2s-5b蛋白抑菌试验的研究过程当中发现:当2s-5b蛋白浓度为700和900μg/ml时,可以抑制黄曲霉孢子的萌发和菌丝的生长。培养3d,即可以看到明显的抑菌圈,说明2s-5b具有抵抗真菌的作用。