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一、大鼠胚胎肝内胆管的形成及其发生机制——细胞角蛋白(CK)和层粘连蛋白(LN)免疫组化研究 (一)CK单克隆抗体及自制EK多克隆抗体的组织反应谱 本研究的主要目的是制备可标记多种上皮、并可区别肝细胞和胆管上皮的高效价表皮角蛋白(EK)抗体，并搞清这种抗体以及来自卫生部北京生物制品所的4株CK单克隆抗体(谷正贤等，1988a)的组织反应谱。 用尿素变性法提取人和牛EK，经过2—3个解聚—重聚合周期进一步纯化。氨基酸分析仪分析其氨基酸构成；不连续的SDS—PAGE表明已达到电泳纯，并显示我们纯化的牛和人EK具有一致的多肽组成(包括分子量分别为68-、65-、63-、57-、55-、50-和46-KD 7种CK多肽)。用牛EK免疫家兔得EK抗血清，双扩效价达1：16(RAK1)、免疫荧光(ⅡF)和双PAP染色效价在冰冻切片和酒精固定，石蜡包埋的组织切片上分别可达1：200和1：2000以上。 在人和大鼠的多脏器组织复合切片上进行的ⅡF、双PAP和ABC染色都显示，自制EK多克隆抗体RAK1和EK单克隆抗体K174具有相同的组织反应谱，它们可标记多数单层和复层上皮，但在大消化腺，和导管上皮反应明确，在腺泡上皮仅有弱阳性或呈阴性；CK单克隆抗体HK2和HK5都能识别包括肝细胞在内的多种简单上皮，但在复层鳞状上皮，HK2阳性而HK5阴性。EK单克隆抗体K27仅标记复层鳞状上皮基底层以上的角化或正在角化的细胞。因此这5种CK抗体不仅能区别上皮性和非上皮性组织，而且能区分上皮的种类。 (二)成人及大鼠肝脏的CK表达——应用RAK1、K174、HK2以及K27进行的免疫组织化学研究 本研究的主要目的是搞清具有不同CK反应谱的CK抗体RAK1、K174、HK2及K27在正常肝内的详细定位，为下一步研究奠定基础。 在20例大鼠肝脏和32例人肝标本上进行的ABC免疫组化染色结果表明，K27不能标记正常肝内任何结构；RAK1和K174不能标记正常肝细胞，但能与胆管上皮及Herring氏管反应，因而可作为胆管系统上皮的标志物；HK2即能识别胆管上皮，又能识别肝细胞，但位于肝腺泡内不同区域的肝细胞HK2阳性强度有一定差异。 (三)大鼠胚胎肝内胆管的发生机制——CK和LN免疫组化研究 本研究的主要目的是探讨肝内胆管发生和CK表达改变的关系以及LN在这一分化过程中所起的作用。 结果表明，第29期胚胎肝脏内，刚出现的门静脉分支周围开始有LN阳性物质产生并沉积，其周围的不成熟肝细胞仍为CK19阴性，但CK18表达增加；至第31期，门静脉分支周围