放线菌M10菌株鉴定及发酵液中抑菌成分初步分离的研究

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本论文是以从陕北沙漠中分离得到M10菌株为研究对象,对该菌株的鉴定、发酵液的抑菌活性、稳定性及其抑菌成分的初步分离进行了研究,主要结果如下:(1)菌株鉴定表明,M10菌株属于链霉菌属。16S rDNA序列分析说明M10菌株与链霉菌属中的Streptomyces qinlingensis的核苷酸有99%的同源性;经典分类法鉴定出, M10菌株的培养特征和生理生化特性方面与Streptomyces qinlingensis存在一定的差异,推断M10菌株可能是Streptomyces qinlingensis的近缘种。(2)在离体条件下M10菌株发酵液对病原真菌有较好的抑制作用:抑制菌丝生长速率法表明对番茄叶霉病菌(Fulvia fulvum)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)、苹果褐腐病菌(Monilia fructigena)、苹果腐烂病菌(Valsa mali)和小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)的菌丝抑制率达到90%以上;M10菌株发酵液对烟草赤星病菌、马铃薯干腐病菌(Fusarium coeruleum)和玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)的孢子萌发EC50分别为72.99 mg/l、79.11 mg/l和44.52 mg/l。管碟法生测结果表明M10菌株发酵液对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、大肠杆菌(Escherichia coli.)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcu aureus)有较强的抑制作用,抑菌圈直径分别是25mm、24mm、20mm和25mm,但对热带假丝酵母(Candida tropicalis)抑制作用很弱。盆栽试验表明,M10菌株发酵原液对小麦白粉病(Erysiphe graminis)保护和治疗作用分别为85.90%和78.69%。田间试验表明,M10菌株发酵原液对黄瓜霜霉病(Pseudoperonospora cubensis)和番茄叶霉病(Fulvia fulvum)的防治效果分别为70.68%和64.68%。(3)稳定性试验结果表明,M10菌株连续转接10代其发酵液活性没有明显的变化,其遗传性状稳定;无论对日光还是灯光,该菌株发酵液活性均无明显地降低;但M10菌株发酵液活性成分的热稳定性较差;M10菌株发酵液对酸性条件稳定,但对碱性环境很敏感。常温下,pH2处理30min其发酵液活性和原始发酵液相当;pH10条件下处理30min抑菌圈直径为19mm,pH11处理100℃30min其活性完全丧失。(4)采用经典的纸层析法和有机溶剂萃取法将M10菌株发酵液中的抑菌成分初步确定为碱性水溶性抗生素这一大类。采用732型阳离子交换树脂(NH4+型)提取活性物质,运用沉淀法得到了M10菌株发酵液的抗生素粗品。经磷钼酸和碘化铋钾薄层显色表明抗生素粗品中有含氮化合物。综合试验,可推知该抗生素粗品中可能含有氨基糖苷类抗生素。
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