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目的:建立糖尿病肾病(DN)金黄地鼠模型,观察核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)等细胞焦亡通路分子及白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子在DN金黄地鼠肾脏的表达;探讨肾消解毒通络方(SJTR)对DN金黄地鼠肾功能的影响及对NLRP3-Caspase-1-GSDMD细胞焦亡信号通路的调控作用及靶点,为临床用药提供实验依据。方法:1.模型建立与分组:将50只清洁级雄性金黄地鼠以随机数字表法分为对照组(10只)、造模组(40只),采用高糖高脂喂养加少量STZ注射的方法构建糖尿病模型,而后依其自然发展为DN模型。造模成功后,随机分为模型组、厄贝沙坦组、中药高剂量组和中药低剂量组四组。2.药物干预:厄贝沙坦组给予厄贝沙坦13.5mg/(kg·d);中药高、低剂量组分别给予SJTR 25.6g/(kg·d)、12.8g/(kg·d);对照组和模型组给予等量生理盐水;连续干预8周。3.指标检测与方法:采用全自动生化分析仪检测各组金黄地鼠血糖、血脂、肾功能等相关指标;采用HE、PAS、Masson染色法观察金黄地鼠肾脏组织病理形态;采用放射免疫法检测胰岛素;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α等炎症因子;采用实时荧光定量RT-PCR检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β等分子m RNA表达;采用SABC及Western Blot检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β等分子的蛋白表达;采用TUNEL染色检测肾脏细胞DNA损伤情况。结果:1.一般情况比较 对照组金黄地鼠一般情况良好,饮食饮水及尿量均正常,精神状况良好,毛发整齐。模型组精神萎靡、毛色晦暗、动作迟缓、多饮多尿。三个给药组上述症状较模型组均有不同程度的改善。2.肾质量、体质量和肾脏指数比较与对照组比较,模型组金黄地鼠肾质量(KW)升高,体质量(BW)下降,肾脏指数(KI)明显升高(P<0.01)。与模型组比较,三个给药组KI降低(P<0.01)。3.血糖、血脂和胰岛素比较与对照组比较,模型组金黄地鼠血清葡萄糖(GLU)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、胰岛素(INS)含量升高(P<0.01)。与模型组比较,三个给药组GLU、TC、TG、LDL-C、INS含量降低(P<0.05)。4.肾功能比较与对照组比较,模型组金黄地鼠24h尿蛋白(24h-UP)、血清肌酐(SCr)、尿酸(UA)升高(P<0.01)。与模型组比较,三个给药组SCr、UA明显降低(P<0.05),中药高剂量组和厄贝沙坦组24h-UP明显降低(P<0.01)。5.肾脏组织病理形态学比较HE染色:对照组金黄地鼠肾脏组织结构与形态未见明显病理改变。与对照组比较,模型组肾小球明显肥大,肾小管上皮细胞排列无序、空泡样变性,部分肾小管萎缩,管腔变窄。与模型组比较,三个给药组肾小球及肾小管病理改变明显减轻。PAS染色:对照组金黄地鼠肾小球毛细血管袢薄而清晰,肾脏结构无异常病理变化。与对照组比较,模型组肾小球内存在许多不规则、结节状PAS阳性物质沉积,肾小球系膜基质增生,基底膜增厚。与模型组比较,三个给药组肾小球PAS阳性沉积物质较少,基底膜增厚明显减轻。Masson染色:对照组金黄地鼠肾脏很少有系膜基质增生和蓝色纤维的沉积。与对照组比较,模型组肾小囊间隙增大,肾小球可见蓝色纤维物质的沉积,肾小球系膜区明显扩大,基质增生。与模型组比较,三个给药组系膜基质增生和纤维沉积的情况明显减少。6.血清炎症因子比较与对照组比较,模型组金黄地鼠血清IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.01)。与模型组比较,中药高剂量组和厄贝沙坦组IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。7.金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β分子m RNA表达比较与对照组比较,模型组金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βm RNA表达升高(P<0.01)。与模型组比较,三个给药组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βm RNA表达降低(P<0.05)。8.SABC法检测金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD分子蛋白表达对照组金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达较弱。与对照组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达升高;NLRP3主要表达于肾小管上皮细胞、肾小球内,Caspase-1和GSDMD主要见于肾小管上皮细胞。与模型组比较,三个给药组NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达降低。9.Western Blot检测金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β分子蛋白表达对照组金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β分子表达较弱。与对照组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,中药高剂量组及厄贝沙坦组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达降低(P<0.05)。10.金黄地鼠肾组织TUNEL染色比较对照组金黄地鼠肾组织可见少量TUNEL阳性细胞。与对照组比较,模型组TUNEL阳性细胞数量明显增加。与模型组比较,三个给药组TUNEL阳性细胞明显减少。结论:1.高糖高脂喂养加STZ少量注射,能成功构建DN金黄地鼠模型。2.DN金黄地鼠肾脏NLRP3-Caspase-1-GSDMD信号通路分子表达增强,加重炎症损伤;细胞焦亡是DN金黄地鼠肾脏炎症损伤的重要机制。3.SJTR可通过调控NLRP3-Caspase-1-GSDMD信号通路抑制DN金黄地鼠肾脏细胞焦亡,拮抗DN肾脏炎症损伤,改善肾功能。