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目的:探讨三氟拉嗪通过抑制FOXO1蛋白从细胞核向胞浆转运,减少多药耐药基因表达,增加胶质瘤 SHG44 多柔比星耐药株(SHG44/DOX)对多柔比星的敏感性。
方法:将SHG44/DOX分为空白组、多柔比星组和多柔比星+三氟拉嗪组。用定量PCR、免疫印迹和免疫荧光法分析FOXO1在细胞核和细胞浆中的表达水平以及多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP在胶质瘤SHG44 和 SHG44/DOX 中的表达差异;用 CCK-8、流式细胞技术、Caspase-3活性检测观察各组细胞活力、细胞周期和细胞早期凋亡;在各组中观察胞核和胞浆中的FOXO1水平、多药耐药蛋白和细胞内多柔比星浓度;用SHG44/DOX构建裸鼠皮下肿瘤模型,对其进行多柔比星或多柔比星+三氟拉嗪进行干预后7、14、21、28天后测量肿瘤体积、肿瘤增殖指数和FOXO1表达。
结果:MDR1、MRP1、LRP和胞浆中的FOXO1在SHG44/DOX中高于SHG44。CCK-8、流式细胞技术和Caspase-3活性检测发现三氟拉嗪能增强多柔比星的细胞毒性作用,使细胞周期停止在G0/G1期,促进细胞早期凋亡。此外,三氟拉嗪抑制FOXO1向胞浆迁徙,抑制多药耐药基因表达,增加细胞内多柔比星浓度。在体内研究中证实多柔比星+三氟拉嗪减少肿瘤体积和瘤内增殖指数,并提高FOXO1表达。
结论:三氟拉嗪有助于FOXO1在细胞核内聚集,以至于降低多药耐药基因表达,并最终减少SHG44/DOX对DOX的耐药性。这些结果将有助于临床提供化疗敏感性,具有重要的肿瘤化疗的临床前景。
方法:将SHG44/DOX分为空白组、多柔比星组和多柔比星+三氟拉嗪组。用定量PCR、免疫印迹和免疫荧光法分析FOXO1在细胞核和细胞浆中的表达水平以及多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP在胶质瘤SHG44 和 SHG44/DOX 中的表达差异;用 CCK-8、流式细胞技术、Caspase-3活性检测观察各组细胞活力、细胞周期和细胞早期凋亡;在各组中观察胞核和胞浆中的FOXO1水平、多药耐药蛋白和细胞内多柔比星浓度;用SHG44/DOX构建裸鼠皮下肿瘤模型,对其进行多柔比星或多柔比星+三氟拉嗪进行干预后7、14、21、28天后测量肿瘤体积、肿瘤增殖指数和FOXO1表达。
结果:MDR1、MRP1、LRP和胞浆中的FOXO1在SHG44/DOX中高于SHG44。CCK-8、流式细胞技术和Caspase-3活性检测发现三氟拉嗪能增强多柔比星的细胞毒性作用,使细胞周期停止在G0/G1期,促进细胞早期凋亡。此外,三氟拉嗪抑制FOXO1向胞浆迁徙,抑制多药耐药基因表达,增加细胞内多柔比星浓度。在体内研究中证实多柔比星+三氟拉嗪减少肿瘤体积和瘤内增殖指数,并提高FOXO1表达。
结论:三氟拉嗪有助于FOXO1在细胞核内聚集,以至于降低多药耐药基因表达,并最终减少SHG44/DOX对DOX的耐药性。这些结果将有助于临床提供化疗敏感性,具有重要的肿瘤化疗的临床前景。