LncRNA MEF2C-AS1对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ploveye999
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
[目 的]卵巢癌是常见的妇科癌症,其发病率在妇科恶性肿瘤中排名第三,但其病死率位于妇科恶性肿瘤之首。既往研究表明lncRNA在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用。有报道lncRNAMEF2C-AS1能够抑制宫颈癌及乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,但尚未见其在卵巢癌中的生物学功能的研究。本研究通过细胞实验探索lncRNAMEF2C-AS1在卵巢癌恶性表型中的生物学功能及机制,为探讨卵巢癌发病机理提供理论及实验基础。[方法]1.培养人卵巢癌OVCAR3、A2780及SKOV3细胞和卵巢上皮IOSE80细胞,RT-qPCR检测lncRNAMEF2C-AS1在人卵巢癌细胞及卵巢上皮细胞株中的表达水平,选择lncRNAMEF2C-AS1水平最低的A2780细胞作为后续实验细胞。Western Blot实验检测卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞中GRB7的蛋白质水平。2.培养A2780细胞,分别应用lncRNA MEF2C-AS1过表达慢病毒LV-MEF2C-AS1及阴性对照病毒LV-NC转染A2780细胞,培养48h后,RT-qPCR检测A2780细胞中lncRNAMEF2C-AS1的水平,明确lncRNAMEF2C-AS1的表达效率。3.将 A2780 细胞分为 LV-MEF2C-AS1、LV-NC 组,分别转染 LV-MEF2C-AS1和LV-NC,分别通过CCK8实验、克隆形成实验、Transwell侵袭实验、划痕实验及流式细胞术检测卵巢癌细胞的增殖活力、克隆形成能力、侵袭能力、迁移能力及细胞的周期分布和调亡情况,明确lncRNAMEF2C-AS1对卵巢癌A2780细胞增殖、侵袭、迁移能力及细胞周期分布和细胞凋亡的影响,从而阐明lncRNA MEF2C-AS1在卵巢癌恶性表型中的生物学功能。4.在卵巢癌A2780细胞中分别转染LV-MEF2C-AS1、LV-NC,培养48h后,Western Blot实验检测各组细胞中细胞周期相关蛋白CyclinD1和细胞调亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2、Bax的蛋白水平,明确lncRNAMEF2C-AS1对细胞凋亡相关蛋白及周期相关蛋白的影响,探讨lncRNAMEF2C-AS1调控细胞凋亡及细胞周期的机制。5.LV-MEF2C-AS1、LV-NC 组细胞,转染 LV-MEF2C-AS1 和 LV-NC,48h 后,通过Western Blot实验检测GRB7的蛋白水平,明确lncRNA MEF2C-AS1对GRB7的调控作用。[结 果]1.卵巢癌 SKOV3、OVCAR3 和 A2780 细胞中 lncRNAMEF2C-AS1 的水平显著低于卵巢上皮IOSE80细胞,并且在A2780细胞表达最低(P<0.05)。2.LV-MEF2C-AS1及LV-NC组细胞分别转染lncRNAMEF2C-AS1过表达病毒及阴性对照病毒后,RT-qPCR检测lncRNAMEF2C-AS1的过表达效率。结果表明LV-MEF2C-AS1组的lncRNA MEF2C-AS1水平明显高于LV-NC组(P<0.001),说明过表达慢病毒LV-MEF2C-AS1能显著提高lncRNAMEF2C-AS1的水平,转染效率高,可用于后续实验。3.CCK8实验结果显示,LV-MEF2C-AS1组在48h、72h和96h的细胞活力明显低于LV-NC组(P<0.05);克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验显示,LV-MEF2C-AS1组的克隆形成数、细胞迁移能力及侵袭能力均明显低于LV-NC组(P<0.001)。4.流式细胞术检测LV-MEF2C-AS1组和LV-NC组卵巢癌A2780细胞凋亡情况,结果显示LV-MEF2C-AS1组凋亡细胞数、凋亡率显著高于LV-NC组(P<0.05)。5.流式细胞术检测LV-MEF2C-AS1组和LV-NC组卵巢癌A2780细胞周期分布情况,结果表明与LV-NC组相比,LV-MEF2C-AS1组处于S期和G2期的细胞百分较高,而处于G1期细胞百分较低(P<0.05)。6.Western Blot实验检测lncRNAMEF2C-AS1对细胞周期相关蛋白及调亡相关蛋白水平的影响,结果显示LV-MEF2C-AS1组卵巢癌A2780细胞中Bax和Caspase3的蛋白水平显著高于LV-NC组,而Bcl-2和CyclinD1的蛋白水平明显低于 LV-NC 组(P<0.05)。7.Western Blot实验检测卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌SKOV3、OVCAR3及A2780细胞中GRB7的蛋白水平,结果显示卵巢癌SKOV3、OVCAR3及A2780细胞GRB7的蛋白水平明显高于卵巢上皮细胞IOSE80(P<0.05)。LV-MEF2C-AS1组中的GRB7蛋白水平明显低于LV-NC组,lncRNAMEF2C-AS1能够下调GRB7的蛋白水平(P<0.05)。[结 论]1.LncRNAMEF2C-AS1在卵巢癌细胞中下调,过表示MEF2C-AS1可显著抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移,在卵巢癌中发挥抑癌基因的作用。2.LncRNAMEF2C-AS1可能通过上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的水平,下调抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1的水平,促进卵巢癌细胞凋亡,抑制细胞周期进展。3.GRB7在卵巢癌细胞中高表达,lncRNAMEF2C-AS1能够下调GRB7的蛋白水平,GRB7可能是lncRNAMEF2C-AS1的靶基因。
其他文献
[目 的]为确保用药安全和有效,澄清羌活类药用植物使用的混乱,在充分掌握药用羌活类植物的野外生存及当地百姓用药情况的前提下,本研究以市售羌活为研究对象,通过从全国各地的药材市场、药店以及网络平台随机采购市售羌活药材,同时获取正品、混伪品及近缘物种的ITS2片段,构建参考序列数据库,以厘清市售羌活的种源问题,为后续制定羌活药材及中成药质量控制标准提供依据。[方法]首先,对NCBI中有关羌活及其常见混
学位
[目 的]探讨在活动性非感染性葡萄膜炎患者玻璃体腔内植入地塞米松缓释剂(Ozurdex)0.7mg的有效性和安全性。[方 法]回顾性分析2019年10月至2021年12月昆明医科大学第一附属医院眼科确诊为活动性非感染性葡萄膜炎合并黄斑囊样水肿(Cystoid Macular Edema,CME)及玻璃体炎性混浊患者进行Ozurdex球内注射,观察治疗后1个月、3个月、6个月患者的最佳矫正视力(Be
学位
伴随着经济全球化的进程,愈来愈多的城市注重打造城市文化品牌,提升城市文化品牌国际影响力。本文以北京城市文化品牌塑造与传播的现状、策略为例,探讨如何主动激发全社会文化创新创造活力,促进传统文化与新生态文化的融合,打造具有鲜明特色和核心竞争力的城市文化品牌。
期刊
[目 的]研究在链佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的C57BL/6小鼠早期1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)中视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)损伤的病理变化及视网膜内层小胶质细胞的活化情况。[方法]以清洁级雄性C57BL/6小鼠为研究对象,以链佐菌素(STZ)(150mg/Kg)诱导C57小鼠1型糖尿
学位
[目的]本实验以人咽鳞状细胞癌Fadu肿瘤细胞为研究对象,在实验中探索EGFRmAb-AuNRs靶向光热作用对下咽癌恶性肿瘤细胞的生物学行为的影响。[方法]本实验采用mAb-EGFR功能化修饰的纳米金棒在近红外激光的照射下诱导人下咽癌Fadu细胞焦亡;采用激光共聚焦显微镜记录不同处理方案下Fadu细胞形态的变化及流式细胞仪,乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)法,ELIS
学位
[目 的]探讨晶状体损伤后促进视神经再生过程中MMP-8及MMP-12的表达变化规律。[方 法]SD大鼠用30G针头穿透角巩膜缘通过破坏晶状体囊袋逐渐形成外伤性白内障与此同时行同侧视神经(距眼球约0.2-0.5 mm,位于视神经眶内段)钳夹性损伤,制作实验动物模型。实验动物分为视神经损伤联合晶体损伤组(ONL)、单纯视神经损伤组(ON)、单纯晶状体(L)、假手术组(Control)。在术后第14天
学位
[目 的]基于前期研究提示HDAC2可能是舌癌发病的关键基因。为此本研究探讨静默HDAC2对舌癌细胞的生物学行为的影响,明确HDAC2作为舌癌诊断、治疗靶点的意义。[方 法]选取三种高表达HDAC2舌癌细胞系,设计针对HDAC2的干扰片段,慢病毒包装细胞系包装,慢病毒感染舌癌细胞及嘌呤霉素筛选在舌癌细胞中稳定抑制HDAC2表达;设立阴性对照组(shRNA-NC)、空载体组(HDAC2-EV)、未处
学位
[目 的]探究云南不同民族育龄期女性卵巢储备功能相关的基因,探讨其可能的遗传学机制,从而对云南不同民族育龄期女性给予个体化、更科学的生育指导及助孕方案。[方 法]我们收集了 2017年1月至2021年6月期间在昆明医科大学第一附属医院进行外周血AMH检测的云南汉族、彝族、白族育龄期女性的数据,按民族和年龄段分组,分析比较不同民族育龄期女性外周血AMH水平的差异。选取年龄、BMI匹配的汉族、彝族、白
学位
[目的](1)对复发性外阴阴道假丝酵母菌病(Recurrent vulvovaginal candidiasis,RWC)、外阴阴道假丝酵母菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)患者的阴道致病白假丝酵母菌进行筛选,选出天冬氨酸蛋白酶(Aspartic acid Protease,Sap)、磷脂酶(Phospholipases,PL)酶活性均为阳性的菌株,比较Sap、PL酶
学位
当今电子科技发展与互联网时代大潮滚滚而来,不可避免的是电子元件散热问题,蛇形微通道散热器由于其占用空间小,以及优秀的散热性能在电子设备散热中取得优势,有助于打破边界层。随着电子元件产生的热流密度越来越高,微通道中的相变是不可回避的问题。本文对蛇形微通道采用数值模拟计算手段研究纳米流体在未相变以及相变下流动散热特性。本文分别以Cu,Al,Al2O3,Si O2纳米颗粒与水形成的纳米流体作为工质进行研
学位