桦褐孔菌多酚提取纯化、鉴定分析及抗氧化活性的研究

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近几十年,植物多酚受到越来越多的国内外专家学者的关注和开发。植物多酚大多存在于植物体内,它具有抑制炎症、抑制肿瘤、抑制病毒及抗氧化等多种生理活性,它是一种具有多元酚结构的植物次生代谢产物。桦褐孔菌是一种生长在桦树上的野生药用、食用菌,含有多种生物活性物质,其主要活性物质为多酚类、多糖类、三萜类等化合物,其具有抗氧化性能的主要是桦褐孔菌中的多酚。为了使桦褐孔菌资源得到充分的开发,提高综合利用率,本论文以桦褐孔菌为实验材料,在单因素实验的基础上,利用正交试验对桦褐孔菌多酚的提取工艺条件进行了优化;从五种大孔树脂中筛选出一种适合分离纯化桦褐孔菌多酚的类型,并确定了该树脂纯化桦褐孔菌多酚的工艺条件;对桦褐孔菌多酚组成成分进行了初步推测;最后比较了桦褐孔菌多酚纯化物、粗提物的抗氧化活性。本课题对桦褐孔菌多酚进行了比较系统的研究,为进一步对桦褐孔菌进行开发提供一定的支持。主要研究内容和结论如下:(1)研究了微波提取和溶剂提取桦褐孔菌多酚的工艺条件。以单因素试验结果为参考,利用正交试验对两种方法提取桦褐孔菌多酚的工艺条件进行了优化。研究结果表明,在溶剂提取桦褐孔菌多酚实验中,料液比为1:20、乙醇体积分数为50%、提取温度为60℃、时间80min,在此条件下进行提取,多酚提取率为2.633%;在微波辅助提取桦褐孔菌多酚试验中,料液比为1:50、乙醇体积分数为50%、微波功率为560W、时间为180s,在此条件下进行提取,多酚提取率为3.186%。微波辅助提取是一种有效、快速的提取桦褐孔菌多酚的方法。(2)考察了大孔树脂纯化桦褐孔菌多酚的工艺条件。通过静态吸附、解吸实验及静态吸附动力学实验,从5种大孔吸附树脂中筛选出D101大孔树脂为适合分离纯化桦褐孔菌多酚的型号,并确定了纯化桦褐孔菌多酚的工艺条件。实验研究结果发现,桦褐孔菌多酚纯化的最佳工艺为:玻璃层析柱40×1.6cm,上样浓度为1.0mg/mL,上样速度为1.0mL/min,洗脱液为70%的乙醇溶液,洗脱流速为1.0mL/min,在最佳分离纯化工艺条件下制得的桦褐孔菌多酚纯化物,其纯度由16.52%提高到了49.77%,提高了3倍。(3)利用HPLC-ESI-MS技术对桦褐孔菌多酚的物质组成进行了初步推测分析。实验结果表明,利用高效液相色谱-质谱联用技术对桦褐孔菌多酚进行分析,初步推测出桦褐孔菌多酚中含有9种物质:无色花色素、花旗松素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、仙茅苷、橡黄素-3-O-己糖苷、7-木糖苷儿茶酚、雪胆素乙、桔皮素、儿茶素、芦丁。(4)研究了桦褐孔菌多酚粗提物、纯化物的抗氧化活性。采用DPPH自由基清除能力和羟基自由基清除能力这两种体外实验来评价桦褐孔菌多酚提取物的抗氧化活性。实验结果表明,在DPPH自由基清除能力测定实验中,Vc的IC50值为6.29μg/mL,桦褐孔菌多酚纯化物的IC50值为6.82μg/mL,桦褐孔菌多酚粗提物的IC50值为10.73μg/mL。在羟基自由基清除能力测定实验中,Vc的IC50值为1.10mg/mL,桦褐孔菌多酚纯化物的IC50值为1.54mg/mL,桦褐孔菌多酚粗提物的IC50值为2.49mg/mL,根据实验结果可知,桦褐孔菌多酚纯化物具有一定的抗氧化性,仅次于Vc的抗氧化能力,但要明显强于桦褐孔菌多酚粗提物。
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