黄瓜冷适应蛋白基因CsWCOR413PM的克隆及干扰载体的构建

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近年来,设施农业栽培中冷害是导致低温胁迫的主要原因,而黄瓜作为我国主要的设施栽培蔬菜,冷害是导致其减产的主要原因。如何有效提高我国黄瓜幼苗抵御冬季低温的环境适应能力、缓解设施农业栽培生产中的冷害和低温胁迫伤害,是冬春季农业设施生产中亟待解决的主要技术问题。冷适应蛋白(cold-regulated,cor413)作为低温胁迫植物时所特有的一类冷响应功能蛋白,可以分为2个具有显著功能区别的冷适应类群,在植物抗寒的过程中均发挥着正向调控的作用。目前,已有的研究结果表明COR413基因已经参与了对植物低温胁迫的响应,但是黄瓜CsWCOR413PM这个基因在低温胁迫中的响应尚未得到报道。本项目的研究基于对黄瓜基因组数据库的挖掘,利用RT-PCR的方法成功克隆了黄瓜CsWCOR413PM(登录号:no.xm_004145299.2)基因的全长序列(genbank),,构建了新的干扰载体。序列分析结果表明:(1)黄瓜CsWCOR413PM基因的c DNA完整开放阅读框序列为609bp,推测其可编码202个氨基酸,存在4个跨细胞膜结构域。(2)在黄瓜的各个器官中均能检测到CsWCOR413PM基因的组织表达。其中,在黄瓜的雌花花冠中的表达量相对最高,其次为卷须;CsWCOR413PM基因在根、茎、叶柄和雌花子房中转录水平均较低。(3)利用黄瓜遗传转化体系,成功构建了CsWCOR413PM-RNAi载体,并获得转基因植株(T0)。(4)低温(6℃)胁迫下分别处理0h、3h、6h、12h、24h和60h,黄瓜“新泰密刺”叶片的CsWCOR413PM基因表达分别升高。结果表明:低温胁迫影响了黄瓜冷适应蛋白CsWCOR413PM基因的表达。
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