多黏菌素作为治疗多重耐药肠杆菌的最后可选择抗生素之一,其耐药菌在全球范围不断被报道,预示未来临床可选择性用药范围在不断缩小。mcr-1是第一个被报道的位于质粒上的多黏菌素耐药基因,它的发现引起全世界对多黏菌素耐药性的关注,之后又先后报道了mcr-2～mcr-10。猪源mcr-1基因阳性耐药菌报道较多,其次是鸡源,鹌鹑源和鸭源mcr-1基因阳性耐药菌鲜有报道,尚未见关于湖南省长沙地区禽源mcr-1基因阳性菌的流行性研究报道。本研究选取长沙地区浏阳市和长沙县的10个禽类（鸡、鸭、鹌鹑）养殖场进行采样,调查研究禽源mcr-1阳性大肠杆菌在长沙地区禽类养殖场中的流行情况,分析mcr-1阳性大肠杆菌菌株的耐药表型、分子分型、携带耐药基因的情况以及遗传环境,寻找mcr-1阳性大肠杆菌在本地禽类养殖场中水平传播的可能性,为评估和防控长沙地区细菌耐药性风险提供科学依据。在此基础上,将MCR蛋白作为靶标,通过计算机辅助药物设计初步筛选能够恢复多黏菌素对mcr-1阳性大肠杆菌杀菌活性的中药提取物,并通过体外药敏实验进一步验证,为后续抗耐药菌药物开发奠定基础。结果:1、在695份标本中检出366份多黏菌素耐药菌株,总分离率为52.66%,分离率呈现出肉鸡场＞鹌鹑场＞蛋鸭场的特点。共筛选到17株多黏菌素mcr-1阳性耐药大肠杆菌,mcr-1阳性率为2.45%。结果表明在长沙地区禽类养殖场中多黏菌素耐药情况普遍存在。2、采用微量肉汤稀释法和微量琼脂稀释法检测17株禽源mcr-1阳性大肠杆菌对12种常用抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）,结果显示17株禽源mcr-1阳性大肠杆菌对多黏菌素E的MIC范围为4～＞128μg/m L,对复方新诺明、氟苯尼考、四环素、环丙沙星全部耐药,对替加环素耐药率为17.65%、哌拉西林-他唑巴坦耐药率42.11%、头孢噻肟耐药率58.82%、头孢噻呋耐药率70.59%,庆大霉素耐药率1.18%,17株菌对美罗培南、阿米卡星都表现敏感,结果表明这17株禽源mcr-1阳性大肠杆菌都是多重耐药菌。3、对17株菌进行二代全基因组测序,并对测序结果分析。Clermont系统分类结果显示,17株禽源mcr-1阳性大肠杆菌主要分布在A（58.8%）、B1（23.5%）和D（17.6%）三个类群中;多位点序列分型（MLST）分析结果表明17株阳性菌中12种MLST类型,包括ST93、ST3941、ST7153、ST1403、ST10338、ST69、ST156、ST1421、ST162、ST6321,以及两株新型ST分型,并无优势分型。大部分mcr-1附近含有典型的质粒接合转移部分以及IV型分泌系统,碲抗性蛋白,未找到ISApl1转移元件。4、本实验选取虚拟筛选评分靠前的11种小分子进行分析,根据虚拟筛选结果,选取黄芪多糖、枳壳提取物继续进行生长曲线实验和微量棋盘法实验,结果表明枳壳提取物对mcr-1阳性大肠杆菌具有体外抗菌作用,黄芪多糖与多黏菌素联合作用能有效降低多黏菌素耐药菌的MIC。结论:mcr-1阳性大肠杆菌耐药菌在长沙县和浏阳市三种禽类养殖场普遍存在,且表现出多重耐药性,未在mcr-1分离株中发现ISApl1插入序列,76.47%的菌株中mcr-1上下游环境含有结合转移元件,枳壳提取物对mcr-1阳性大肠杆菌具有体外抗菌作用,黄芪多糖与多黏菌素联合作用能有效降低多黏菌素耐药菌的MIC。