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以交联法和微胶囊法固定化磷脂酶A1,考察固定化方法、固定化载体和固定化条件与固定化酶的活力回收的关系,结果表明,微胶囊包埋法固定化磷脂酶A1的最佳条件是:壳聚糖(DD%=85%、分子量为1.3×105)浓度为1.5%,海藻酸钠浓度为3%,戊二醛浓度1%,钙离子浓度为0.5mol/L,pH值为6。固定化酶的活力回收达到81%,半衰期为350h。 在固定化磷脂酶A1时,利用磷酸盐为酶抑制剂,与磷脂酶A1活性中心氨基酸残基结合。使戊二醛基与磷脂酶A1的非活性氨基残基缩合,起到保护酶活性中心基团,提高固定化酶活力的作用。证明磷酸盐是磷脂酶A1的竞争性抑制剂,并求出抑制参数Ki值。 经正交实验L8(27),壳聚糖、海藻酸钠、载酶量对固定化酶活力影响比较显著,确定最佳固定化酶条件。对壳聚糖/海藻酸钠微胶囊进行红外光谱分析,同时利用扫描电镜(SEM)对微胶囊内部结构进行考察,表明微胶囊具有规则的通孔结构,有很大的内表面积,可增加包埋酶的效率,提高磷脂酶与卵磷脂的接触界面面积和固定化酶的活力回收。 研究游离磷脂酶A1和固定化磷脂酶A1改性磷脂反应条件。确定了最佳反应条件:固定化酶水解磷脂的最佳温度为50℃,反应溶液pH值为8,2%溶血磷脂加入量为4mL,水解反应时间为10小时,且反应溶液中加入溶血磷脂对酶解磷脂的影响最显著。 考察了溶血磷脂的部分性能,结果表明,溶血磷脂的润湿能力、乳化稳定性优于普通磷脂。同时,研究了溶血磷脂基本理化指标和红外光谱分析。 溶血磷脂HLB较大,易形成O/W型乳化剂,可制备热力学稳定的微乳化体系。利用溶血磷脂作乳化剂,制备含胆固醇的微乳液,以胆固醇为油相,溶血磷脂为乳化剂,正丙醇为共表面活性剂,制备成微乳液。最终产物呈透明或半透明的均相稳定液体。