【摘 要】
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沙门菌在自然界中存在比较广泛,是重要的人畜共患病病原菌,可以造成人类食源性中毒,危害严重。沙门菌的种类繁多,对家禽危害比较严重的有鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌等,其中鸡白痢沙门菌是对我国家禽养殖业危害比较严重的病原菌之一,可以通过垂直和水平传播,很难根除,种鸡场鸡白痢的净化仍然是目前的主要工作。关于沙门菌病的净化,《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》要求到2020年全国
【基金项目】
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国家现代农业产业体系-肉鸡产业技术体系岗位（CARS-41-G13）；
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沙门菌在自然界中存在比较广泛,是重要的人畜共患病病原菌,可以造成人类食源性中毒,危害严重。沙门菌的种类繁多,对家禽危害比较严重的有鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌等,其中鸡白痢沙门菌是对我国家禽养殖业危害比较严重的病原菌之一,可以通过垂直和水平传播,很难根除,种鸡场鸡白痢的净化仍然是目前的主要工作。关于沙门菌病的净化,《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》要求到2020年全国所有种鸡场达到净化标准,鸡白痢净化的核心是淘汰阳性感染的鸡,而传统的细菌分离鉴定技术过程复杂,耗时较久,并不适合用于临床的检测;以分子生物学为基础的检测方法大都需要昂贵的仪器和专业的操作人员,也不适合临床推广;以免疫学为基础的检测技术是目前使用最多的检测技术,免疫学方法简单方便,在鸡白痢的临床检测中,全血或血清的平板凝集实验是使用最广泛的方法;由于该方法使用的凝集抗原制备菌株不稳定,且没有进行提取与纯化,因此在准确性方面可能存在不足,会有假阳性的情况;另外,平板凝集的灵敏度较差,实际应用中可能有漏检的情况,因此需要一种特异性强、灵敏度高的快速检测方法。脂多糖（LPS）的主要组成成分O抗原是抗原决定因子,是沙门菌以血清学分类的基础,基于O抗原的特异性,OIE认为用LPS作为包被抗原进行的ELISA检测方法是最测定鸡白痢、鸡伤寒最特意的方法,因此本研究旨在提取鸡白痢沙门菌的LPS,建立包括鸡白痢沙门菌在内的D群沙门菌抗体检测方法。本研究以筛选出的免疫原性较好的鸡白痢沙门菌TC 3株为制备菌株,用改良的热-酚水法提取方法提取并纯化出了鸡白痢沙门菌的LPS,产率为1.463%;用蛋白酶消化后测得的蛋白浓度为0.0995 mg/m L;纯化后的多糖含量为18.80%;将提取的LPS溶解后进行凝胶电泳及银染鉴定,结果显示LPS呈阶梯结构,证明LPS结构完整。用提取的LPS作为包被抗原,采取方阵滴定法等确定了一系列反应条件,确定的抗原包被浓度为2.233 mg/L;待检血清样品的最佳稀释度为1∶200,作用时间为60 min;最适封闭条件为用5%脱脂乳,37℃封闭60 min;酶标二抗工作质量浓度为1∶8 000,室温作用60 min;显色条件为避光反应15 min;阴阳性判定标准为S/P值≥0.5。通过检测大肠杆菌及鼠伤寒沙门菌等多个血清群的病原菌阳性血清,结果显示均无明显交叉反应,证明该检测方法的特异性良好;通过对倍比稀释的阳性血清进行效价检测,结果显示该方法的检测灵敏度是鸡白痢平板凝集的400倍;重复性验证结果显示,批间重复和批内重复的变异系数均小于10%,说明该方法重复性良好;对283份临床血清进行检测的结果表明,该方法与Biochek公司的D群抗体检测试剂盒的阳性符合率为94.67%,阴性符合率为98.11%,总符合率为98.59%。用建立的间接ELISA检测方法和平板凝集对来自湖北5个不同父母代种鸡养殖场的1185份临床血清样品进行检测,结果显示,间接ELISA检测出的鸡白痢抗体个体阳性率在4.35%～21.88%之间,总体个体阳性率为17.03%;平板凝集检测的鸡白痢抗体个体阳性率在0%～4.35%,总体个体阳性率为7.43%,间接ELISA检测的阳性率均显著高于平板凝集检测结果的阳性率。综上所述,本研究成功建立了基于LPS的D群沙门菌抗体检测方法,该检测方法特异性强、敏感性好,可用于临床鸡白痢沙门菌等D群沙门菌感染的抗体检测,将为鸡白痢的检测与净化提供有效的技术与工具。
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