牵张成骨(distraction osteogenesis，DO)技术是一种在口腔颌面外科广泛应用的骨再生技术，但其成骨的确切机制仍不明了。作为成骨细胞的主要来源，骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs）的动员和迁移对成骨能力具有决定性的作用。然而，我们对DO过程中BMMSCs究竟如何动员并参与骨再生的机理所知甚少。交感神经具有调节骨代谢的重要作用；本研究组在既往研究中发现：在骨牵张过程中，失交感神经支配可以加速骨痂成熟速度，但交感神经如何调控BMMSCs的动员和迁移有待深入研究。血小板衍生因子（platelet-derived growthfactor，PDGF）作为一种成骨趋化因子，在成骨细胞和血管内皮细胞均有表达，并发挥诱导BMMSCs迁移及维持BMMSCs在血管周龛稳定性的作用。鉴于交感神经与成骨细胞、血管内皮细胞、BMMSCs具有密切的关系，本课题拟探讨交感神经如何通过调控PDGF表达，从而影响下颌骨DO中BMMSCs动员和迁移。我们通过体内和体外模型发现：失交感神经支配可上调成骨细胞PDGF表达，而下调血管内皮细胞周围PDGF表达，同时促进BMMSCs沿PDGF的趋化迁移能力。本研究揭示了交感神经调控下颌骨DO骨形成的干细胞机理并为临床上改进DO技术提供理论依据。本文分为以下4个部分：1失交感神经支配对大鼠下颌骨牵张成骨PDGF表达的影响目的：明确失交感神经支配下DO骨痂中不同区域PDGF表达变化。方法：成年雄性SD大鼠18只，随机分为对照组（A组，n=9）和实验组（B组，n=9），A组行右侧牵张器植入术及下颌骨截断术，B组行右侧牵张器植入术、下颌骨截断术及双侧颈交感干离断术。5天延迟期后，以0.2mm/12h的速度牵张，共10d，于固定期第1天、14天及28天每组处死3只，对牵张区骨痂进行免疫组织化学染色，并用IPP6.0软件分析平均光密度，比较A、B两组标本骨小梁周围及血管周围PDGF表达情况。结果：B组骨小梁周围PDGF表达量明显高于A组,而血管内皮细胞周围PDGF表达量明显低于A组（P<0.05）。结论：失交感神经支配可上调骨小梁周围PDGF表达，而使血管内皮细胞周围PDGF表达下降。2失交感神经支配对大鼠下颌骨成骨细胞PDGF表达的影响目的：明确失交感神经支配对体外培养的大鼠下颌骨成骨细胞PDGF表达的影响。方法：联合消化法及全血贴壁法体外培养大鼠下颌骨BMMSCs并对其成骨、成脂分化潜能及细胞表面标志物进行鉴定。之后将BMMSCs成骨诱导10天后进行碱性磷酸酶染色，明确BMMSCs分化为成骨细胞的程度。将诱导的成骨细胞分为A组（对照组）和B组（实验组），A组培养液中加入去甲肾上腺素（Noradrenaline，NE），B组常规培养，对细胞爬片行免疫组织化学染色，并用IPP6.0软件分析平均光密度，比较A、B两组细胞PDGF表达情况。结果：大鼠下颌骨BMMSCs经成骨诱导10天后碱性磷酸酶染色为强阳性。免疫组织化学染色结果显示，B组细胞PDGF表达量明显高于A组（P<0.05）。结论：失交感神经支配可上调体外培养的大鼠下颌骨成骨细胞PDGF的表达。3失交感神经支配对内皮细胞PDGF表达影响目的：明确失交感神经支配对体外培养的内皮细胞PDGF表达的影响。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞系并鉴定其CD34、第Ⅷ因子表达情况。将细胞分为A组（对照组）和B组（实验组），A组培养液中加入去甲肾上腺素，B组常规培养，对细胞爬片行免疫组织化学染色，并用IPP6.0软件分析平均光密度，比较A、B两组细胞PDGF表达情况。结果：体外培养的人脐静脉内皮细胞系CD34、第Ⅷ因子表达均为阳性。免疫组织化学染色结果显示，B组细胞PDGF表达量明显低于A组（P<0.05）。结论：失交感神经支配可下调体外培养的内皮细胞PDGF的表达。4失交感神经支配对PDGF诱导下BMMSCs迁移能力的影响目的：比较相同的浓度PDGF诱导下，失交感神经支配与交感神经支配时BMMSCs迁移能力。方法将体外培养的大鼠下颌骨BMMSCs分为A组（对照组）和B组（实验组），A组培养液中加入去甲肾上腺素，B组常规培养，在Transwell小室的上室中加入BMMSCs，下室加入不同浓度的重组大鼠PDGF-BB二聚体，计数迁移到下室的细胞数。结果：迁移到下室的MSC数目与PDGF浓度呈正性相关。相同PDGF浓度下，B组发生迁移的BMMSCs数目明显较A组多（P<0.05）。结论：失交感神经支配能够提高PDGF所诱导的BMMSCs迁移能力。