【摘 要】
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目的:研究自噬在LXR受体激动剂(GW3965)抑制肺癌细胞对吉非替尼继发性耐药中的作用及可能机制。材料与方法:采用MTT法测定LXR受体激动剂(GW3965)联合吉非替尼对PC9/GR细胞增殖的影响;使用Western blot法测定LXR受体激动剂(GW3965)和吉非替尼联合用药时,PC9/GR细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达的变化;并利用吖啶橙(AO)染色法,荧光显微镜观察LXR
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目的:研究自噬在LXR受体激动剂(GW3965)抑制肺癌细胞对吉非替尼继发性耐药中的作用及可能机制。材料与方法:采用MTT法测定LXR受体激动剂(GW3965)联合吉非替尼对PC9/GR细胞增殖的影响;使用Western blot法测定LXR受体激动剂(GW3965)和吉非替尼联合用药时,PC9/GR细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达的变化;并利用吖啶橙(AO)染色法,荧光显微镜观察LXR受体激动剂(GW3965)和吉非替尼联合用药时PC9/GR细胞自噬小体的变化;流式细胞术检测LXR受体激动剂(GW3965)联合吉非替尼对PC9/GR细胞凋亡的影响;Western blot法测定LXR受体激动剂(GW3965)和吉非替尼联合用药时,PC9/GR细胞中自噬信号通路相关蛋白:AKT和p-AKT、m TOR和p-m TOR、AMPK和p-AMPK以及70s6k1和p-70s6k1的表达情况。结果:1.吉非替尼和GW3965单药都显示出一定的抑制PC9/GR细胞增殖的效应,此种效应在单药药物浓度≥20μM时更明显(P<0.05);GW3965联合吉非替尼对PC9/GR细胞增殖的抑制明显优于吉非替尼单药(P<0.05)和GW3965单药(P<0.05,1μM和10μM时:P<0.01)。2.与对照组比较,吉非替尼和GW3965单药对PC9/GR细胞自噬相关蛋白Beclin1的表达以及LC3 II/I比例无明显影响(P>0.05),二者联合用药促进了Beclin1的表达以及LC3 II/I比例的上升(P<0.01);与吉非替尼或GW3965单药比较,二者联合用药也促进了Beclin1的表达(P<0.01)以及LC3 II/I比例的上升(P<0.05)。3.与对照组比较,吉非替尼单药对PC9/GR细胞自噬小体的产生无明显影响(P>0.05),而GW3965单药促进了PC9/GR细胞自噬小体的产生(P<0.05);无论是与对照组比较(P<0.01),还是与吉非替尼(P<0.01)或GW3965单药(P<0.05)对比,联合用药促PC9/GR细胞形成自噬小体的效应更明显。4.吉非替尼和GW3965单药都促进了PC9/GR细胞的凋亡(P<0.001),二者的联合用药进一步增加了细胞的凋亡(P<0.01)。5.无论与对照组比较,还是与GW3965或者吉非替尼单药比较,吉非替尼和GW3965联合用药都降低了p-AKT和p-m TOR蛋白的表达,升高了p-AMPK蛋白水平。结论:LXR受体激动剂(GW3965)联合吉非替尼可能通过诱导自噬抑制PC9/GR细胞增殖,其机制与AKT/m TOR和AMPK自噬信号通路有关。
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