论文部分内容阅读
目的:睡眠-觉醒是一种生物学的昼夜节律。孤束核是内脏传入神经核团,同时作为低位脑干的睡眠诱发区,与许多内脏疾病的睡眠问题有关,但是其产生的机制尚未完全理清。5-羟色胺是作用于睡眠-觉醒的重要单胺类神经递质。故本实验采用脑立体定位法在孤束核进行微注射5-羟色胺系统的药物,研究5-羟色胺在孤束核影响睡眠-觉醒时的作用通路,同时推测孤束核在睡眠中发挥的作用,为进一步的理解睡眠机制、治疗内脏疾病引起的睡眠问题提供理论依掘,为药物研发提供靶点。 方法:1、实验动物:本实验选用体重为220~260g的健康成年雄性SD大鼠。2、动物手术:将大鼠固定于脑立体定位仪上,参照大鼠脑立体定位图谱,定位孤束核的位置,埋置导药管;同时在皮层放置2个电极记录脑电,颈下2个电极记录肌电。动物恢复5天,然后进行记录。 3、脑电记录:采用日本光电脑电机对动物进行每天4h,连续4天的脑电图记录。 4、病理切片:记录完毕,动物采用心脏灌注取脑,做石蜡切片进行HE染色完成组织定位鉴定;并对NS、5-HTP、MS三组动物做冰冻切片,进行免疫组化染色。 5、统计方法:采用SPSS10.0统计软件分析,每组动物进行自身配对t检验。α=0.05,双侧t检验 结果:1、各组自身配对检验:对照组(NS组)无统计学意义;5-HTP组、8-OH-DPAT组、H89组差别有统计学意义,均使觉醒减少,慢波睡眠增加,异相睡眠增加;MS组无显著的统计学意义,但是有明显的觉醒增加、睡眠减少的趋势;spiperone组、cAMP组差别有统计学意义,觉醒增加,慢波睡眠减少,异相睡眠减少。 2、NS组、5-HTP组、MS组进行的孤束核5-HTIAR染色示:与NS组相比,5-HTP组的5-HTIAR上调,MS组的5-HTIAR下调。闷成创卜花开究生学位论文3、NS组、5一HTP组、MS组进行的孤束核5一轻色胺能神经纤维染色示:与NS组相比,5一HTP组的5一轻色胺能神经纤维终末染色加强,MS组的5一轻色胺神经纤维终末染色减弱。4、NS组在中脑进行5一HTIAR的染色:5一HTIAR在中脑的分布广泛,尤其在中缝核、网状结构LDT用PT处。5、NS组、5一HTP组、MS组进行的中脑5一HT神经纤维染色示:与NS组相比,5一HTP组的5一HT能阳性细胞少,MS组的5一HT能阳性细胞多。结论:1、孤束核作为睡眠诱发区,5一轻色胺在慢波睡眠和异相睡眠时相发挥着重要的作用。2、5一HT在孤束核影响睡眠一觉醒时是通过作用5一HT,AR,祸联G订。蛋白,使cAMP生成减少,PKA磷酸化减少而发挥觉醒减少、睡眠增加的生物学效应。3、在孤束核处,5一轻色胺增多延长慢波睡眠:而在中脑处则是5一轻色胺减少引起慢波睡眠延长:这说明了在孤束核和中脑之间存在相互抑制的网络调节系统。4、作为异相睡眠发生的授时因子,孤束核通过低位脑千的上行抑制系统影响上行激动系统,产生异相睡眠。5、5一轻色胺在睡眠一觉醒中的作用主要通过突触后靶组织发挥。从异相睡眠看,胞外5一轻色胺含量与中缝背核的抑制是一致的,可能是通过脑桥被盖背外侧核/脑桥被盖网状核(LDT爪PT)的胆碱能细胞功能的去抑制而引起异相睡眠。