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[目的]探讨OECs和NSCs联合移植入全横断脊髓急性损伤期大鼠脊髓后,大鼠后肢运动和感觉功能的变化,并观察移植细胞的存活、迁移和分化以及损伤脊髓节段内神经纤维再生的情况,为OECs和NSCs联合移植用于脊髓损伤治疗提供理论和实验依据。[方法]体外分别培养绿色荧光蛋白转基因胎鼠海马源性NSCs和新生鼠嗅球来源的OECs并进行免疫染色鉴定。采用大鼠胸段脊髓全横断模型,将SD大鼠随机分为手术组、NSCs移植组、OECs移植组和联合细胞移植组。手术组行T9-10脊髓全横断术,细胞移植组于术中以明胶海绵为载体将神经干细胞或嗅鞘细胞移植入损伤脊髓,联合移植组则是同时移植NSCs和OECs。在8周内每周用行为学BBB运动功能评分评估大鼠后肢运动功能的变化;于术后4周和8周时检测进行大脑皮质感觉诱发电位;术后8周时进行皮质运动刺激观察大鼠后肢收缩运动,后进行心内灌注处死动物,取脊髓行冰冻切片在倒置荧光显微镜观察移植细胞的存活和迁移情况,并行HE染色观察损伤脊髓组织形态学,应用免疫组织化学染色检测植入的NSCs分化情况及宿主神经纤维再生;在术后6周时应用BDA追踪检测皮质脊髓束的再生情况;使用SPSS11.5软件包对数据进行统计学处理。[结果]1.体外培养7d的悬浮神经球呈Nestin阳性,OECs呈p75NGFR阳性。2.BBB评分:单纯脊髓全横断手术损伤组大鼠BBB运动功能评分随术后时间延长缓慢增高。应用重复测量分析方法可以得出:各细胞移植组大鼠后肢BBB运动功能评分比手术组高(p<0.05);联合移植组大鼠后肢运动功能评分比OEC移植组大鼠高(p<0.05),而其它各组之间比较没有统计学差异(p>0.05)。单因素方差分析结果:NSCs移植组大鼠在术后的BBB功能评分一直比手术组高(p<0.05);与手术组相比,OEC移植组大鼠后肢运动功能恢复体现在术后5W、7W和8W(p<0.05);而在术后4W至8W,联合移植组大鼠的BBB分数明显比手术组增高(p<0.05)。在术后移植6W后,联合移植组大鼠的BBB评分比OECs移植组显著增高(p<0.05)。3.CSEP结果显示:手术组大鼠未检测到波形,各移植组均检测到CSEP,表现为P1波、N1波潜伏期较手术组均明显缩短(p<0.05),P1-N1波幅较手术组明显增高(p<0.05)。术后8W时,与单细胞移植组相比,联合移植组大鼠的P1-N1波幅显著增高(p<0.05)。4.各组大鼠在术后8周时皮质运动刺激检测均未见后肢有收缩运动。5.各组大鼠在术后8周时植入细胞均有存活,并向脊髓损伤段头侧和尾侧迁移。NSCs移植组和联合细胞移植组中植入的NSCs可以向神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞方向分化,且在联合移植组中NSCs分化为神经元和少突胶质细胞的百分比增加,而星形胶质细胞没有明显变化。6.HE染色显示损伤脊髓内有空洞,并伴有瘢痕组织产生。7.BDA追踪显示:在损伤脊髓上1节段,手术组未见阳性纤维,移植组可见较多纤维,且在联合移植组靠近瘢痕头侧脊髓内可见少量阳性纤维;在损伤脊髓瘢痕,各组均未发现阳性纤维。8.免疫组化检测:手术对照组:在损伤脊髓头侧端有少量5-HT、CGRP、GAP-43及突触素阳性纤维,瘢痕节段内未发现阳性纤维,损伤脊髓尾侧还可见少量CGRP、GAP-43及突触素阳性反应物;细胞移植组:在损伤脊髓头侧端有较多量5-HT、CGRP、GAP-43及突触素免疫反应阳性,联合移植组靠近瘢痕头侧可见少量阳性;瘢痕节段内未检测到阳性;损伤脊髓尾侧可见较多CGRP、GAP-43及突触素阳性反应物。[结论]1.在移植术后8周,来源于GFP小鼠的NSCs和OECs可以在大鼠损伤脊髓内存活,并向头尾侧迁移;植入的NSCs可以向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化,并且联合移植可以提高NSCs在损伤脊髓内向神经元和少突胶质细胞分化的百分数。2.细胞移植显著改善脊髓全横断大鼠后肢运动和感觉功能,联合移植组对大鼠感觉功能恢复作用较单独移植组好,而对大鼠运动功能恢复不明显。3.OECs和NSCs联合移植能促进纤维再生,但不能使其穿过瘢痕组织。4.实验组大鼠后肢对大脑皮质运动区刺激没有收缩运动,提示可能无功能突触形成。