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第一部分高糖对培养的人脐静脉内皮细胞p38 MAPK信号系统表达的影响目的:检测高糖对人脐静脉血管内皮细胞系p38MAPK信号系统表达的影响,从而探讨p38MAPK信号系统在高糖诱导糖尿病视网膜血管病变中的作用。方法:以人脐静脉血管内皮细胞﹙HUVEC﹚为研究对象,模拟糖尿病状态,以高浓度葡萄糖刺激HUVEC,采用RT-PCR、Western-blot法检测细胞中p38MAPK、转化生长因子β2和基质金属蛋白酶活力和蛋白表达情况的变化,电镜观察超微结构及流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:高浓度葡萄糖可使内皮细胞中p38MAPK、MMP-2和TGFβ2表达增加,超微结构及细胞周期发生变化。结论:高糖诱导糖尿病视网膜血管病变可能部分通过p38MAPK信号系统表达增强。第二部分p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中的表达变化目的:检测p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中表达的变化,从而探讨p38 MAPK信号系统在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy DR)发生发展中的作用及其机制。方法:用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导仓鼠糖尿病模型,HE染色观察光镜下视网膜的形态特征及变化,用免疫组织化学法检测正常对照组(非糖尿病动物组)和糖尿病动物模型组视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化。血清学检测仓鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和电化学发光法检测胰岛素水平等变化。提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达情况,Western-blot检测糖尿病仓鼠视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2蛋白情况。结果:糖尿病仓鼠不仅表现为高血糖,还表现为高TG血症。糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,视网膜超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化。糖尿病仓鼠视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达呈升高趋势、蛋白表达增多,与正常对照组相比于造模后16周末时即差异具有统计学意义(P < 0.05)。结论:此为研究p38 MAPK信号途径参与DR的发病机制提供了实验依据。