【摘 要】
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目的:探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）抑制剂氧化苦参碱（OM）对翼状胬肉成纤维细胞（HPFs）增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探索其作用机制,为预防、治疗及防止术后翼状胬肉复发提供新的方向。方法:1.通过原代细胞培养获得正常结膜成纤维细胞（NFs）和HPFs,观察细胞形态,并应用ICC法鉴定细胞。2.采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测NFs、HPFs细胞增殖
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目的:探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）抑制剂氧化苦参碱（OM）对翼状胬肉成纤维细胞（HPFs）增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探索其作用机制,为预防、治疗及防止术后翼状胬肉复发提供新的方向。方法:1.通过原代细胞培养获得正常结膜成纤维细胞（NFs）和HPFs,观察细胞形态,并应用ICC法鉴定细胞。2.采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测NFs、HPFs细胞增殖、迁移和侵袭能力。3.通过RT-qPCR、WB分别检测NFs、HPFs中TGF-β1及EMT相关指标E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白的表达变化。4.利用CCK-8法检测不同浓度及相同浓度OM不同作用时间对HPFs增殖的影响。5.用适宜浓度OM处理HPFs,分为未处理组（HPFs组）和处理组（OM组）,检测两组间细胞迁移和侵袭能力、TGF-β1与EMT相关指标mRNA及蛋白的变化情况。结果:1.成功培养、纯化、鉴定NFs、HPFs。两者中波形蛋白（Vimentin）呈阳性,细胞角蛋白（CK）呈阴性,结合其细胞形态,可鉴定为成纤维细胞。2.CCK-8法、细胞划痕和Transwell侵袭实验结果示:HPFs的增殖、迁移及侵袭能力均强于NFs,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.RT-qPCR 及 WB 结果示:HPFs 中 TGF-β1 与 Vimentin mRNA 及蛋白表达量均高于NFs,而E-cadherin低于NFs,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。4.OM能抑制HPFs的增殖,最适抑制浓度和时间为4mg/ml、48h。5.OM组TGF-β1与Vimentin mRNA及蛋白表达量均较HPFs组降低,而E-cadherin较HPFs组升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。此外,OM组细胞迁移与侵袭能力均较HPFs组减弱,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.NFs和HPFs在形态结构、生长增殖、迁移侵袭等方面存在明显差异,推测翼状胬肉中成纤维细胞发生的生物学特征转变,可能与TGF-β1 及 EMT 相关。2.OM可抑制HPFs增殖、迁移和侵袭能力,并呈时间、浓度依赖性。其作用与部分下调TGF-β1,逆转EMT相关指标密切相关,可能成为预防、治疗及防止术后翼状胬肉复发的新辅助治疗药物,但其具体的作用机制还有待深入研究。
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