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自身免疫性甲状腺炎(Autoimmune thyroiditis,AIT)是一种器官特异性自身免疫病,包括桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)、萎缩性甲状腺炎(Atrophythyroiditis)、产后甲状腺炎(Postpartum thyroiditis,PPT)和无痛性甲状腺炎(painlessthyroiditis)。AIT患者体内存在免疫耐受障碍,发病机制与细胞免疫和体液免疫异常均相关。在辅助型T细胞中,Th1、Th2细胞为Th细胞的亚群。二者分别介导细胞免疫及体液免疫。部分研究认为,HT患者以Th1细胞免疫占优势为主,GD患者则是Th2型细胞在其发病过程中起主导作用;但亦有部分研究持对立观点或认为二者作用均衡。MicroRNA(miRNA)是一类在人体广泛分布的内源性非编码RNA,为机体后转录层次上控制基因表达的重要分子。miRNA可参与调节各种细胞的生理过程,与人类疾病关系密切。miR-155作为众多microRNA中的一员,已发现在血液系统疾病,肿瘤等疾病中发生改变。MiR-155对多种免疫细胞中有着极强的调节作用,过表达miR-155可促进Th1细胞分化,而miR-155的缺失则可致CD4+T细胞出现向Th2细胞的极化现象。近年来的相关研究表明,在如类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化(MS)等自身免疫性疾病中均存在miR-155的表达异常,而miR-155通过调控免疫细胞应答参与自身免疫性疾病的发生,发展及转归。本研究通过高碘诱发NOD.H-2h4小鼠发生自发性自身免疫性甲状腺炎(Spontaneous autoiimune thyroiditis,SAT),观察此动物模型中Th1及Th2细胞的动态变化,并检测甲状腺、脾脏、肝脏、肾脏中miR-155的动态改变,探讨miR-155对碘致AIT的可能影响及作用机制。 材料与方法: 选取4周龄NOD.H-2h4雌性小鼠84只,体重20克左右,随机分为对照组及高碘饮水组。高碘组饲以含0.05%碘化钠的无菌水(相当于小鼠正常碘摄入量的1000倍,1000HI),对照组饲以无菌双蒸水。分别于实验开始后第0、2、4、6、8、10,12周麻醉处死各组动物。留取各组NOD.H-2h4小鼠甲状腺;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠血清甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平;制备各组NOD.H-2h4小鼠脾脏单个核细胞悬液,流式细胞仪检测Th1、Th2细胞的表达水平;提取甲状腺、脾脏、肝脏、肾脏中small RNA,实时定量RT-PCR检测miRNA-155的表达水平;提取小鼠脾细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测Th1、Th2转录因子T-bet,GATA-3,相关细胞因子IFN-γ,IL-4的mRNA表达水平。应用SPSS17.0软件处理和分析数据。参数计量资料:以mean±SD表示,两组比较采用独立样本t检验,相关分析采用Pearson线性相关,显著性检验水准设为P<0.05。 结果: 1、NOD.H-2h4小鼠予以高碘饮水喂养后,经甲状腺HE染色观察淋巴细胞浸润情况并进行甲状腺炎症程度评分可知,实验开始8周后NOD.H-2h4小鼠甲状腺炎的发生率、甲状腺炎症程度、血清TgAb滴度均较对照组小鼠显著升高(P<0.05)。且随着高碘饮水时间的延长,以上四者均逐渐升高。 2、发生SAT的NOD.H-2h4小鼠脾细胞中Th1细胞所占比例及T-bet,IFN-γmRNA表达量自实验开始后的第6周始与对照组相比显著升高(P<0.05); Th2细胞比例及GATA-3、IL-4的mRNA水平与对照组相比并未发生显著改变(P>0.05)。随着高碘饮水时间的延长,脾细胞中CD4+IFN-γ+细胞所占比例逐渐升高。 3、发生SAT的NOD.H-2h4小鼠,自实验开始后的第8周始脾脏中miR-155表达水平较对照组相比有显著增高(P<0.05);自实验开始后的第10周始甲状腺中miR-155表达水平较对照组显著增高(P<0.05)。随着高碘饮水时间的延长,两种组织中miR-155表达水平逐渐升高。肝脏及肾脏中miR-155表达水平较对照组相比并未发生显著改变(P>0.05)。 4、发生SAT的NOD.H-2h4小鼠,脾脏miR-155表达水平与TgAb滴度显著正相关(r=0.825,P<0.01);与Th1细胞比例显著正相关(r=0.872,P<0.01)。甲状腺miR-155表达水平与TgAb滴度显著正相关(r=0.575,P<0.01);与Th1细胞比例显著正相关(r=0.642,P<0.01)。 结论: 1、高碘诱导甲状腺炎发生的NOD.H-2h4小鼠脾脏Th1细胞比例显著升高,提示Th1细胞可能参与该小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生发展,在该疾病中占免疫优势地位。 2、高碘诱导甲状腺炎发生的NOD.H-2h4小鼠脾脏及甲状腺miR-155表达水平较对照组显著升高。脾脏及甲状腺miR-155表达水平与TgAb滴度及Th1细胞比例显著正相关,提示miR-155可能通过影响Th1细胞在自身免疫性甲状腺炎的发生发展中发挥重要作用。