功能化量子点探针的制备及在疾病诊断中的应用

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近年来,量子点以其独特的光学性质被广泛应用于生物医学检测当中。本文首先采用高温油相法制备了高质量的量子点,探讨了影响量子点荧光性质的因素。其次,分别采用超声乳化和二氧化硅包裹的方法对量子点进行了亲水性改性,并与羊抗人IgG偶联,评价了其作为特异性荧光探针的可行性。然后,采用溶剂挥发法和原位法制备了量子点编码微球,研究了其在非极性溶剂、极性溶剂以及不同pH值条件下的稳定性,并初步构建了液相生物芯片的检测平台。最后,制备了可用于体外检测肿瘤标志物的量子点免疫荧光试纸条,并自主研发了量子点免疫荧光检测仪,对试纸条的质量进行了评价,并用于临床检测。实验结果表明:1、对于Cd1-xZnxSe量子点来说,270°C是临界温度,在此温度以上量子点的发射波长随反应时间的增加呈蓝移的趋势;对于Cd1-xZnxSe1-ySy量子点来说,反应时间和投料比对量子点的荧光性能有很大影响,可以通过调节前体的投料比调节发射波长。2、超声乳化改性对量子产率影响不大,纯化过程简单,但是成球性不好,粒径较大。二氧化硅改性粒径均匀,分散性好,但是反应过程繁琐,会导致量子产率下降。对水溶性的量子点进行了免疫试验,发现实验组和对照组差异明显,可以成功地应用于生物标记。3、在PBS缓冲液中,溶剂挥发法和原位法制备的量子点编码微球的荧光稳定性都很好;在环己烷中,前者制备的量子点编码微球量子点容易泄露,但是后者制备的量子点编码微球稳定性很好;在不同pH值的溶液下,前者制备的量子点编码微球的荧光强度波动很大,后者制备的量子点编码微球的荧光强度波动较小。初步构建了液相生物芯片的检测平台,利用微流控芯片系统可以控制悬浮微球的单列单个通过,利用光纤检测系统可以成功对编码微球进行解码。4、建立了新的肿瘤标志物(HCG和AFP)的量子点免疫层析检测方法,对HCG检测来说,反应时间为15min,加样体积为50μL,检测的灵敏度为0.85IU/L;对AFP检测来说,反应时间为10min,加样体积为50μL,检测的灵敏度为3.6ng/mL。将AFP量子点免疫荧光试纸条应用到临床检测,检测AFP的临界值为25ng/mL。1000例临床实验检测结果与电化学发光相比,假阴性率为4.38%,假阳性率为3.98%,检测结果的可信度很高。该研究成果将为肿瘤标志物的社区快速筛查提供重要的实验依据。
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