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增殖诱导配体(APRIL)和B淋巴细胞刺激因子(BAFF)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族中两个关系密切的两个成员。它们不仅能够促进B、T淋巴细胞的增殖和分化而且在细胞免疫和体液免疫中起着极其重要的作用。大量实验表明,一些重组表达的细胞因子(如IFN-γ、CD40L)作为疫苗的免疫佐剂时,可明显提高疫苗的免疫能力,以及增强动物对免疫抑制疾病的抵抗力。在畜禽细菌病毒病的治疗中,传统药物(如抗生素)的副作用大,而细胞因子可以克服这一缺点。在国外,重组人胞外可溶性功能区BAFF(sBAFF)已进入人体Ⅰ期临床试验来治疗普通变异免疫缺乏症患者以及IgA缺陷症患者,但是国内在这方面的研究尚属空白。目前,关于APRIL作为免疫佐剂的研究国内外尚未见报道。本实验室为了提高人的可溶性APRIL和BAFF的稳定性以及提高纯化效率获得大量目的蛋白,构建了两个新的融合蛋白hAPRIL-Fc和hBAFF-Fc。将hAPRIL-Fc和hBAFF-Fc两个基因构建到表达载体Pet28a后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经Protein A亲和层析柱纯化,得到分子量大小分别为42.9KDa的hAPRIL-Fc蛋白和43.6KDa的hBAFF-Fc蛋白,最后利用流式细胞仪、激光共聚焦和MTT法检测两个重组蛋白的生物学活性。此外,本文还针对非洲爪蟾溶菌酶(xlLYZ)进行了相关研究。本实验通过RT-PCR法获得xlLYZ基因的开放阅读框,并鉴定其结构与功能。基因全长为462bp,编码153个氨基酸。通过对其基因序列和氨基酸序列的分析可知,其包括一个信号肽序列和8个保守的半胱氨酸残基(Cys25,Cys49,Cys84,Cys96,Cys100,Cys114,Cys135 and Cys147)。通过 ClustalW 软件分析,和已知物种的 LYZ氨基酸序列比对,同源性较高。重组xlLYZ蛋白表达形式为包涵体,经过稀释复性法获得具有活性的重组蛋白;经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫转印检测(Western blotting)鉴定;并在体外检测了 xILYZ溶菌酶的抑菌活性。发现xlLYZ溶菌酶的最适温度和PH分别为40℃及5.5。