【摘 要】
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为获得特异性抗IBDV单链抗体基因，我们从分泌抗IBDV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离总RNA，经RT-PCR体外克隆了重、轻链可变区基因，所得克隆基因分别长369bp和324bp，基因内无
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为获得特异性抗IBDV单链抗体基因，我们从分泌抗IBDV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离总RNA，经RT-PCR体外克隆了重、轻链可变区基因，所得克隆基因分别长369bp和324bp，基因内无终止密码子，为开放读框，分别编码123个和108个氨基酸，序列中含有明确的三个CDR区和四个FR区及维持抗体结构所必须的两个半胱氨酸残基.BLAST分析结果显示其与已发表的小鼠抗体可变区基因的较高同源性，表明所克隆的基因为重排的小鼠抗体可变区基因.将此单链抗体基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中，并转化大肠杆菌TG1构建成携带单链抗体基因的重组菌，再用辅助噬菌体M13KO7包装形成重组噬菌体---即在PⅢ蛋白上融合单链抗体的噬菌体颗粒.用IBDV固相抗原对其进行三轮亲和筛选后，经竞争ELISA鉴定阳性克性的编码产物具有与亲本抗体相同的抗原结合活性和特异性，随机挑取阳性克隆进行核苷酸序列测定，证实单链抗体实体基因部分未见改变.至此，我们用噬菌体呈现技术获得了拚接正确，完整的功能性重排小鼠抗IBDV单链抗体基因及表面展示剂ScFv，从而为拓展该抗体的应用范围奠定了基础.
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